[发明专利]一种测定放线菌新种M8JJ-5中脂肪酸种类的方法

说明书

本方案公开了放线菌中细胞脂肪酸检测技术领域的一种测定放线菌新种M8JJ‑5中脂肪酸种类的方法，包括以下步骤：步骤一、制备皂化试剂、甲基化试剂、萃取溶剂、碱洗涤试剂；步骤二、样品处理、向试管内依次加入皂化试剂、甲基化试剂、萃取溶剂、碱洗涤试剂；步骤三、样品测试：抽取试管内的上层有机层注入到Trace1310气相色谱串联TraceISQ质谱仪内，并用Nist08Library软件进行分析。本发明较全面的提供了一种快速、准确的方法。

技术领域

本发明涉及放线菌细胞脂肪酸检测的技术领域，具体涉及一种测定放线菌新种M8JJ-5中脂肪酸种类的方法。

背景技术

脂肪酸是细菌细胞脂类的主要成分，是细胞膜和细胞壁的组成成分,是一类重要的分类特征。脂肪酸的类型、大小和不饱和度对细胞膜的理化性质影响很大。放线菌脂肪酸碳链的大小一般主要在C₁₂-C₁₈之间，类型有支链、分支和复杂形式。

脂肪酸的分析应在标准化的条件下进行，因为脂肪酸组分的相对含量因菌龄与培养条件的不同而异，在进行不同种属放线菌的脂肪酸测定时，要确保获得的菌体是在相同培养条下且应在对数生长期后获得，当前通常采用MIDI(MicrobialIdentificationSystem)Sherlock全自动微生物鉴定系统，对不同菌株的脂肪酸图谱分析，同时与标准数据库进行比对，确定菌体的细胞脂肪酸成分。该方法由于是通过对细胞中的脂肪酸和脂肪酸标准品在气相色谱上的出峰时间进行比对，进而确定细胞脂肪酸的种类。具有准确度不高，需要购买标准品的缺点。

发明内容

本发明意在提供一种测定放线菌新种M8JJ-5中脂肪酸种类的方法，以解决现有的检测方法准确度不高的问题。

本方案中的一种测定放线菌新种M8JJ-5中脂肪酸种类的方法，包括以下步骤：

步骤一、试剂的制备：

①试剂1-皂化试剂：将45gNaOH溶于150mL甲醇内，并加入150mL蒸馏水；

②试剂2-甲基化试剂：190mL浓盐酸、275mL甲醇溶于135mL蒸馏水；

③试剂3-萃取溶剂：200mL正己烷与200mL甲基叔丁醚混合均匀；

④试剂4-碱洗涤试剂：10.8gNaOH溶于900mL蒸馏水；

步骤二、样品处理：

①将活化好的放线菌菌株M8JJ-5接种于R2A固体培养基中，在30℃培养至对数生长期后收获菌体培养物；

②皂化：取0.1g的菌体培养物置于试管中，并向试管内加入1～3mL的试剂1，拧紧试管盖并震荡5～10s，放入95～100℃的沸水浴中水浴30min；

③甲基化：打开管盖后，试管内加入1.9～2.1mL的试剂2，拧紧试管盖后震荡5～10s，在79～81℃的温度下水浴10min后取出冷却至室温；

④萃取：再向试管内加入1.15～1.3mL的试剂3，拧紧试管盖并快速震荡10min，离心后弃去下层水相；

⑤洗涤：加入2.8～3.2mL试剂4到试管内，并拧紧试管盖，震荡试管5min，离心3min；

步骤三、样品测试：

抽取试管内的上层有机层注入到气相色谱串联TraceISQ质谱仪内，并用Nist08Library软件进行分析。