[发明专利]野木瓜中绿原酸含量的检测方法

说明书

本申请公开了生物技术领域的一种野木瓜中绿原酸含量的检测方法，包括1)取野木瓜产品粉碎成粉末，加入甲醇，超声提取30min，过滤得到待测样品；2)取绿原酸标准品称量后用甲醇配置成1mg/ml绿原酸对照品储备液；3)采用高效液相色谱法测定，其中，固定相为Accucore aQ的色谱柱，流动相A为磷酸盐缓冲溶液，流动相B为乙腈，A：B的体积比为85：15；流速为0.6mL/min；检测波长：325nm；柱温30℃；进样量为2μL；4)以对照品储备液的峰面积为纵坐标，以对照品储备液浓度为横坐标，绘制绿原酸的标准曲线，根据标准曲线计算待检样品中绿原酸的含量。上述方法能有效检测低浓度下含有绿原酸的野木瓜产品，检测时间短，准确度高。

技术领域

本发明及生物技术领域，具体涉及野木瓜中绿原酸含量的检测方法，更具体是一种低浓度下野木瓜产品中绿原酸含量的检测方法。

背景技术

野木瓜是一种热带水果，属木通科，是热带常绿小乔木)，又名铁脚梨、木瓜突等，享有“百益之果”美称，为中国的特有植物，是一种名实相符的天然、纯绿色、有机食用果品，是现代人最适宜的休闲、食疗果品。分布在中国大陆的贵州、重庆等地，其中以贵州遵义野木瓜最为驰名，遵义正安也被称为“野木瓜之乡”。

野木瓜以“味酸”者为佳，木瓜有机酸组成复杂、种类丰富，如小分子脂肪酸莽草酸、柠檬酸等，具有抗炎、抗菌、镇痛的作用。原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、肉桂酸等酚酸类成分具有显著的抗炎、抗氧化、抗病毒、利胆等多种生物活性，熊果酸、齐墩果酸等三萜酸类成分具有抗炎抑菌、降低转氨酶、防止肝硬化、镇静、降血糖等多种功效。

为了有效的监控野木瓜的产品质量，需要对木瓜中的多种有机酸成分一一进行含量测定，例如在测定绿原酸含量的时候，如公开号为CN105954392A公开的一种超高效液相色谱测定绿原酸含量的方法，并具体披露，取样品2g置于20ml棕色容量瓶中，加体积比1：1的甲醇和乙腈混合液15ml超声处理10分钟使溶解，取出，蒸干，加乙腈至刻度，再精密量取续滤液2置10ml棕色容量瓶，加水至刻度，摇匀，吸取2ml样品液加入离心管进行净化，溶液过滤膜后注入超高效液相仪测定；色谱条件如下：色谱柱为ACQUITYUPLCBEHC182.1mm×50mm，1.7μm；色谱柱的柱温：40℃，流动相A：0.1％甲酸溶液；流动相B：甲醇，采用梯度洗脱，流速为0.3mL/min；检测波长：297nm；分析时间：7min。梯度洗脱时，洗脱梯度为：0-1min，99％A、1％B；1-1.5min，90％A、10％B；1.5-5min，60％A、40％B；5-7min，10％A、90％B；7.0-7.1min，1％A、99％B。由于需要梯度洗脱，耗时过长，且检测出的含量准确度较低。

又如《中国当代医药》2010年第10期，114-115页介绍的野木瓜片中绿原酸的含量测定，其采用了HPLC法，色谱柱：Hypersil BDS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：乙腈∶0.1％磷酸(11∶89)，流速为1ml/min，测定波长为327nm。柱温：室温。结果显示：绿原酸在10.21～102.1μg/ml浓度范围内有良好的线性关系(r＝1.0000)，回收率为98.90％(RSD＝0.8％)，但是当绿原酸在10μg/ml浓度以下使用该方法的测定效果并不准确，而现有技术的野木瓜产品如野木瓜片、野木瓜粉，其浓度都较低且基本是低于10μg/ml以下的，因此需要重新建立一个用于低于10μg/ml浓度下，且无需梯度洗脱的针对野木瓜产品中绿原酸含量的测定方法。

发明内容

本发明所要提供的野木瓜产品中绿原酸的检测方法，尤其是野木瓜片和野木瓜粉中绿原酸含量的检测方法。

本发明的方案是：一种野木瓜中绿原酸的检测方法，包括以下步骤：

1)取野木瓜产品粉碎成粉末，加入甲醇，超声提取30min，过滤得到待测样品；

2)取绿原酸标准品称量后用甲醇配置成1mg/ml绿原酸对照品储备液；