[发明专利]一种中国恒河猴γδT细胞的培养方法

说明书

本发明公开了一种中国恒河猴γδT细胞的培养方法，属于细胞生物学技术领域。本发明使用的OpTmizer细胞培养基中加入低浓度的猴自体血清，T细胞培养必备的IL‑2，以及已报道能够促进γδT细胞扩增的IL‑18等物质，能较快且稳定地在体外培养出高纯度的γδT细胞，培养的细胞具有典型的γδT细胞形态特征和免疫学特性，此外，该方法采用猴自体血清培养细胞，降低外源性血清对实验结果的干扰、步骤少，适合于需使用中国恒河猴γδT细胞的科研工作。

技术领域

本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种中国恒河猴γδT细胞的培养方法。

背景技术

γδT细胞是同时具备天然免疫和获得性免疫特性的T细胞(D'Ombrain M.C.,Hansen D.S.,Simpson K.M.,et al.,gammadelta-T cells expressing NK receptorspredominate over NK cells and conventional T cells in the innate IFN-gammaresponse to Plasmodium falciparum malaria[J].Eur J Immunol,2007.37(7):p.1864-73)，主要分布于皮肤、小肠、肺等粘膜以及皮下组织，在机体抗病原微生物感染、抗肿瘤及治疗自身免疫疾病中均扮演了重要的角色，具有免疫杀伤和免疫调节功能(BonnevilleM.,O'Brien R.L.,Born W.K.,Gammadelta T cell effector functions:a blend ofinnate programming and acquired plasticity[J].Nat Rev Immunol,2010.10(7):p.467-78.)，也具有杀细胞毒作用(Havranek P.,Hajkova H.,[Volvulus of theappendix][J].Rozhl Chir,1989.68(10):p.663-5)。γδT细胞不需要抗原递呈细胞对抗原进行处理和递呈而直接发挥杀伤作用(Brandes M.,Willimann K.,Moser B.,Professional antigen-presentation function by human gammadelta T Cells[J].Science,2005.309(5732):p.264-8.)。γδT细胞通过其特定的受体识别微生物的磷酸化代谢产物、脂质抗原等常见的抗原，如分枝杆菌的单烷基磷酸酯等。

根据δ链的亚型，人类的γδT细胞可分为Vδ1和Vδ2两大亚群。Vδ1T细胞亚群集中分布于上皮组织中，参与呼吸道、肠道的粘膜免疫反应；Vδ2T细胞亚群占外周血的T淋巴细胞的1％～10％，占到成人外周血中γδT细胞的80％～90％，为外周血中主要的γδT细胞。当发生特定病原生物感染时，Vδ2T的数量能迅速达到血液中白细胞总量的一半以上(MoritaC.T.,Jin C.,Sarikonda G.,et al.,Nonpeptide antigens,presentation mechanisms,and immunological memory of human Vgamma2Vdelta2 T cells:discriminatingfriend from foe through the recognition of prenyl pyrophosphate antigens[J].Immunol Rev,2007.215:p.59-76.)。异戊烯焦磷酸单酯(Isopentenyl pyrophosphate,IPP)是一种较常见的磷酸类抗原，是病变细胞或感染细胞所释放的危险信号，Vδ2T细胞主要通过其TCR与IPP及其类似物结合而被激活发挥功能(Gober H.J.,Kistowska M.,AngmanL.,et al.,Human T cell receptor gammadelta cells recognize endogenousmevalonate metabolites in tumor cells[J].J Exp Med,2003.197(2):p.163-8.)。因此，以IPP及其类似物作为刺激因子来刺激γδT细胞可以使γδT细胞尤其是Vδ2T细胞扩增及特异性地激活。