[发明专利]适用动物源性食品班布特罗胶体金快速检测卡及制备方法

说明书

本发明旨在提供一种适用动物源性食品班布特罗胶体金快速检测卡及制备方法。制备获得的班布特罗胶体金快速检测卡具有灵敏度高、特异性强、稳定性高、操作简单、便于携带等特点，不需要复杂的仪器设备和专业的技术人员，其分析结果易于判断，短时间内可直接用肉眼观察到检测结果，广泛适用于快速食品检测等现场检测分析，在班布特罗监测领域具有广泛的实用性和开发价值。

技术领域

本发明主要涉及免疫检测的技术领域，具体地说，本发明涉及一种班布特罗胶体金快速检测卡及其制备方法的技术领域。

背景技术

班布特罗(bambuterol，CIM)是由Astra公司开发，1987年上市。为亲脂性的叔丁舒喘宁的前体药物，可延长母体药物作用的时间。有较强的支气管扩张作用。用于阻塞性呼吸道疾病，如支气管性气喘、慢性支气管炎震颤和心脏副作用。班布特罗属β2型兴奋剂，研究比较广泛，是继莱克多巴胺、克伦特罗和沙丁胺醇之后的新一代β-肾上腺素受体类激动剂。较大剂量地使用班布特罗，还可以减少胴体的脂肪含量，提高瘦肉率，促进家畜生长、达到改善肉质的效果，因此被作为饲料添加剂非法用于动物源性食品生产中。而长期使用会造成班布特罗在可食性动物组织内蓄积残留，引起食用者中毒。有震颤、头痛、强直性肌肉痉挛、心悸、心动过速等，特别是对冠心病高血压患者、老年人容易产生危害，严重的甚至有生命危险。

班布特罗作为新型“瘦肉精”物质，检测手段滞后，尤其是快速检测产品缺乏，目前已建立的检测班布特罗的方法有高压液相色谱法(HPLC)、液相色谱一质谱联用法(LC-MS)、超高效液相色谱一串联质谱分析方法(μPLC-MS/MS)、气相色谱一质谱联用法(GC-MS)、高效毛细管区带电泳法(CZE)、酶联免疫吸附法(ELISA)等。这些方法操作需要对操作人员进行特殊培训，且实验结果不能立即显示，因此不适用于商检生产者对怀疑对象的快速在线检测和监控。因此急需适合批量、快速筛选的快速检测方法，以满足政府和企业的检测需要。

胶体金检测卡是以胶体金作为免疫层析的指示物，其原理是以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，并同时使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体(如抗体或抗原)发生高特异高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域(检测带)，通过直接运用可目测的胶体金标记物而得到直观的实验结果。

发明内容

针对目前国内对于班布特罗的检测尚无灵敏度高、特异性强、稳定性高、操作简单、便于携带的检测方法的技术问题，本发明旨在提供班布特罗胶体金快速检测卡及其制备方法，通过制备班布特罗单克隆抗体，制备检测班布特罗的检测卡，获得一种适用动物源性食品的班布特罗胶体金快速检测卡，该检测卡灵敏度高、特异性强、稳定性高、操作简单、便于携带，在班布特罗监测领域具有广泛的实用性和开发价值。

本发明通过以下技术方案实现的：

本发明提供一种适用动物源性食品的班布特罗胶体金快速检测卡，包括含有胶体金标记的班布特罗单克隆抗体溶液喷涂的金标垫、绘有T线和C线的NC膜、样品垫以及吸水垫，进行组装。其中，T线使用1.5μL/mL人工制备的班布特罗单克隆抗体T液进行绘制，C线使用250倍稀释的PC-2羊抗鼠的C液进行绘制。

本发明中，所述一种适用动物源性食品的班布特罗胶体金快速检测卡的具体制备过程为：

(1)选取1.35％红色金颗粒标记取1mL胶体金溶液于2mL试管中，加入0.2M K₂CO₃1.5-3.0μL/mL，混匀；加入抗体原液0.5-2.5μL，混匀后静置5min；加入含10％BSA的封闭液10μL/mL，混匀后静置5min；4℃，12000r/min离心，5min；1/20体积的复溶液复溶，喷涂于已封闭好的玻璃纤维素膜上，迅速转移至冷冻干燥机内进行冷冻干燥，制作成为金标垫；

(2)用包被液将抗原稀释，将PC-2羊抗鼠250倍稀释制得C液，将制得的人工抗原50倍稀释获得T液；