[发明专利]嗜热菌来源的赖氨酸脱羧酶的异源表达方法及其应用

权利要求书

1.带有促溶标签的赖氨酸脱羧酶融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含促溶标签和来自嗜热菌的赖氨酸脱羧酶，二者之间通过Linker连接；

其中，所述促溶标签选自荧光蛋白、麦芽糖结合蛋白、谷胱甘肽转移酶或它们的组合。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述荧光蛋白选自红色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、蓝绿色荧光蛋白、绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、橙色荧光蛋白或光学加亮荧光蛋白；优选RedStar、tdtomato或mCherry中的任意一种或几种的组合；和/或，

所述赖氨酸脱羧酶选自以下①～④中任一个：①来源于嗜热菌Thermosynechoccuselongatus的赖氨酸脱羧酶TeLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或者与SEQ ID NO：1具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；②来源于Tepidanaerobactersyntrophicus的赖氨酸脱羧酶TsLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:84所示，或者与SEQ IDNO:84具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；③来源于Geobacilluskaustophilus的赖氨酸脱羧酶GkLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:86所示，或者与SEQ IDNO:86具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；④来源于Thermomicrobium roseum的赖氨酸脱羧酶TrLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:88所示，或者与SEQ ID NO:88具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列。

3.以荧光蛋白为促溶标签的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含荧光蛋白和目标蛋白，二者之间通过Linker连接；

其中，所述荧光蛋白的定义同权利要求2中所述。

4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，其为红色荧光蛋白-Linker-来自嗜热菌的赖氨酸脱羧酶，或来自嗜热菌的赖氨酸脱羧酶-Linker-红色荧光蛋白；

优选地，所述赖氨酸脱羧酶选自以下①～④中任一个：①来源于嗜热菌Thermosynechoccus elongatus的赖氨酸脱羧酶TeLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或者与SEQ ID NO：1具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；②来源于Tepidanaerobacter syntrophicus的赖氨酸脱羧酶TsLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:84所示，或者与SEQ ID NO:84具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；③来源于Geobacillus kaustophilus的赖氨酸脱羧酶GkLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:86所示，或者与SEQ ID NO:86具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；④来源于Thermomicrobium roseum的赖氨酸脱羧酶TrLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:88所示，或者与SEQ ID NO:88具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；

更优选地，所述融合蛋白为红色荧光蛋白-Linker-TeLDC，红色荧光蛋白-Linker-TsLDC，红色荧光蛋白-Linker-GkLDC，或红色荧光蛋白-Linker-TrLDC；

其中，所述Linker包括螺旋形式的Linker或低疏水性、低电荷效应的氨基酸组成的柔性Linker，所述Linker的长度至少为10个氨基酸；

优选地，所述Linker为柔性Linker，更优选为(GGGGS)₃或(SG)_5-8；

所述红色荧光蛋白选自RedStar、tdtomato或mCherry中的任意一种或几种的组合。

5.聚核苷酸，其特征在于，所述聚核苷酸编码权利要求1-4任一项所述融合蛋白。

6.荧光蛋白作为促溶标签在异源蛋白表达中的应用，其中，所述荧光蛋白的定义同权利要求2中所述。