[发明专利]一种降解玉米秸秆的芽孢杆菌复合菌剂及其制备方法、降解秸秆的方法

权利要求书

1.一种用于促进玉米秸秆降解的菌剂，其特征在于，按百分数计包括以下成分：解淀粉芽孢杆菌25％、副水杨芽孢杆菌25％、地衣芽孢杆菌25％和芽孢杆菌25％；所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens strain m164b)保藏号ACCC 04304，所述副水杨芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis strain Bac84)保藏号ATCC 9945a，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis strain)保藏号ACCC 11080，所述芽孢杆菌(Bacillussp.strain LA134)保藏号ACCC 06386。

2.权利要求1所述的一种用于促进玉米秸秆降解的菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens strain m164b)，副水杨芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis strain Bac84)，地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis strain)，芽孢杆菌(Bacillus sp.strain LA134)分别接种至LB液体培养基中进行培养；

S2.待其生长至指数期，通过各种配伍组合，获得优化混合菌群，并将其进行保存。

3.根据权利要求1所述的用于促进玉米秸秆降解的菌剂，其特征在于，所述菌剂中的活菌数为1.0×10⁸-1.0×10⁹CFU/mL。

4.根据权利要求2所述的一种用于促进玉米秸秆降解的菌剂制备方法，其特征在于，所述培养基的培养条件为：在37℃±2℃温度条件下，180±10r/min摇床培养24～36h。

5.根据权利要求2所述的一种用于促进玉米秸秆降解的菌剂制备方法，其特征在于，所述的解淀粉芽孢杆菌、副水杨芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和芽孢杆菌的活菌数之比为1:1:1:1。

6.根据权利要求2所述的一种用于促进玉米秸秆降解的菌剂制备方法，其特征在于，所述的保存为将经过蒸汽灭菌浓度为70-90％的甘油与菌液混合，放于-20℃冰箱中保存。

7.根据权利要求2所述的一种用于促进玉米秸秆降解的菌剂制备方法，其特征在于，所述的菌种在培养基中培养包含以下步骤：

S1.制备液体发酵培养基，将复合菌剂接种到液体发酵培养基上，得到发酵液；

S2.将制备得到的发酵液中加入一定比例的秸秆，降解秸秆。

8.根据权利要求7所述的一种用于促进玉米秸秆降解的菌剂制备方法，其特征在于，所述的液体发酵培养基接种有10％的菌剂，以体积分数计。

9.根据权利要求7所述的一种用于促进玉米秸秆降解的菌剂制备方法，其特征在于，所述的发酵液中的秸秆的添加量为每100ml发酵液中加入2g秸秆。

10.根据权利要求7所述的一种用于促进玉米秸秆降解的菌剂的制备方法，包含以下步骤：

S1.将MgSO₄·7H₂O 0.5g，KNO₃ 0.5g，Na₂HPO₄ 1.8g，KH₂PO₄ 0.3g，NaCl 5g，加水定容至1000ml，121℃湿热灭菌25分钟得到液体发酵培养基，将复合菌剂按照10％的比例接种到液体发酵培养基上，得到发酵液；

S2.每100ml发酵液中加入2g秸秆，所述秸秆干燥至恒重。室温下在180±10r/min摇床速度下降解秸秆；

S3.发酵4～6天，得到秸秆发酵液。