[发明专利]一种降血糖的牡丹活性肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种降血糖的牡丹活性肽的制备方法，具体如下，以带种皮的牡丹籽粕为原料，先萃取得到牡丹蛋白，向牡丹蛋白溶液中加入复合酶，所述复合酶为中性蛋白酶、胰蛋白酶、氨肽酶，酶解后得到的牡丹活性肽用环糊精进行包埋，去除辛辣味，牡丹蛋白内的肽键，在中性蛋白酶和胰蛋白酶这两类内肽酶作用下，从肽链内部将蛋白质水解为多肽，胰蛋白酶水解羧基侧为碱性氨基酸多肽，水解的牡丹活性肽含有IGF‑I生长因子，氨肽酶可以作用于氨基末端，把含有疏水性氨基酸结构的苦肽彻底降解为氨基酸，酶解后得到特定分子量1000Da‑1500Da的牡丹活性肽，得率在95％以上，IGF‑I生长因子，使牡丹活性肽具有降血糖的作用，由动物实验得到证实。

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，涉及一种降血糖的牡丹活性肽的制备方法。

背景技术

不完全统计数据显示，我国现在有9400万糖尿病病人，也即是说，平均每10位成年人 中就有1位糖尿病病人，血糖是指血液中的葡萄糖含量，体内各细胞活动所需的能量大多数 来自葡萄糖，所以血糖有必要保持必定的水平才能保持体内各器官和活动的需求，正常人的 空腹血糖浓度为3.9～6.1毫摩尔/升，若超越7.0毫摩尔/升称为高血糖，正常情况下，人体能 够通过激素调节和神经调节这两大调节系统确保血糖的来源与去路保持平衡，使血糖维持在 一定水平，但是在遗传因素与环境因素的共同作用下，两大调节功能发生紊乱，就会出现血 糖水平的升高。

牡丹为芍药属的落叶亚灌木，是中国栽培牡丹品种的近缘野生种之一，牡丹花可以食用， 牡丹籽油中含有丰富的不饱和脂肪酸，具有非常重要的保健及药用价值，牡丹籽油中不饱和 脂肪酸含量高达87.60％，其中亚油酸的含量占22.19％，亚麻酸占35.70％，油酸占27.14％， 亚油酸和亚麻酸是人体必需脂肪酸，具有降血脂，降胆固醇和促进脂肪代谢，增强免疫，预 防冠心病等生理活性，近年来，牡丹籽油的使用越来越多，产生的废弃副产物牡丹籽粕也随 之增多，怎么合理的利用牡丹籽粕，是一个越来越重要的研究课题。

发明内容

本发明的目的在于克服上述问题，研究出可得到特定分子量牡丹活性肽的方法，该方法 制备安全，工艺简便，不用利用超滤分级，提高了制备效率，降低了生产成本。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

一种降血糖的牡丹活性肽的制备方法，所述方法步骤为，

S1：将牡丹籽粕粉碎，用超临界CO₂萃取脱脂，过筛，按料液比1:20～30与水混合，加 入NaOH调节pH9～10，50～60℃条件下磁力搅拌60～70min，离心(3500～4000r/min， 13～18min)，取上清液，加入HCl，调节pH3.0～4.0，离心(3500～4000r/min，13～18min)，沉淀用少量去离子水清洗至中性后冷冻干燥，得牡丹籽蛋白；

S2：取步骤S1所得蛋白3份，加入复合蛋白酶进行酶解，所述复合蛋白酶包括中性蛋白 酶1～3份、胰蛋白酶3～5份、氨肽酶6～7份，酶活力90～110u/mL，酶解反应pH为6.0～7.0， 反应温度40～50℃，反应时间3～4h，酶解后，高温灭活，加入10％～15％的HCl，调节pH至 4.0～4.5，在50～70r/min条件下搅拌，使未酶解的牡丹蛋白呈凝乳状析出，过滤分离，提纯后 喷雾干燥得牡丹活性肽，SDS-PAGE电泳测定牡丹活性肽分子量为1000Da-1500Da之间，用 凯氏定氮法计算得到1000Da-1500Da牡丹活性肽的得率在95％以上。

中性蛋白酶和胰蛋白酶这两类内肽酶从肽链内部将蛋白质水解为多肽，胰蛋白酶水解羧 基侧为碱性氨基酸多肽，水解的牡丹活性肽含有IGF-I生长因子，氨肽酶可以作用于氨基末 端，把含有疏水性氨基酸结构的苦肽彻底降解为氨基酸。

优选的，所述牡丹蛋白籽粕为带种皮的原料，种皮中有部分可溶性成分混溶在牡丹肽中， 是牡丹肽活性较高。

优选的,步骤S1牡丹籽粉碎过80～100目筛。