[发明专利]一种白色霞水母毒素抗毒血清的制备方法

权利要求书

1.一种白色霞水母毒素抗毒血清的制备方法，其特征在于：

白色霞水母毒素采用甲醛进行减毒，减毒处理后白色霞水母毒素与弗氏佐剂混合进行动物免疫，期间不断进行效价检测，免疫后采血，离心获得兔血清；然后采用白色霞水母毒素特异偶联的CNBr-activated Agarose 4B亲和层析填料进行亲和层析纯化，获得纯净白色霞水母毒素特异性抗体，即白色霞水母毒素抗毒血清；

所述减毒处理为向白色霞水母毒素中加入浓度为35-40%甲醛并于37℃恒温箱中恒温反应5-7天；而后再加入浓度为35-40%甲醛，再于37℃恒温反应5-7天；随后透析除去甲醛，高速离心、过滤后将上清液保存于-80℃待用；所述透析液为pH7.0，浓度为20-50 mM PBS；35-40%甲醛与毒素的体积比值（v:v）为0.45%-0.55%；

所述离心获得抗毒血清使用白色霞水母毒素特异偶联的CNBr- activated Agarose4B亲和层析填料亲和层析纯化，进而得到白色霞水母毒素蛋白特异性免疫球蛋白抗体；

所述白色霞水母毒素特异偶联的CNBr- activated Agarose 4B亲和层析填料的制备方法为先使用1-3mM HCl活化CNBr-activated Agarose 4B填料，再将其与白色霞水母毒素在20-50 mM Na₂CO₃的碱性条件下，于4°C偶联 8-12h，即得到白色霞水母毒素偶联的CNBr-activated Agarose 4B亲和层析填料。

2.按权利要求1所述的白色霞水母毒素抗毒血清的制备方法，其特征在于：所述动物免疫为使用新西兰大白兔作为免疫动物，采用减毒后的白色霞水母毒素抗原与弗氏完全佐剂混合进行初免，初免后进行三次加强免疫，分别于初次免疫后 2 周、4 周、6 周免疫三次。

3.按权利要求2所述的白色霞水母毒素抗毒血清的制备方法，其特征在于：所述初免的免疫剂量为0.35-0.45mg/kg；初次免疫3周后进行第二次免疫，免疫剂量为0.175-0.225mg/kg；2周后进行第三次免疫，免疫量剂量为0.175-0.225mg /kg ，2周后进行第四次免疫，免疫剂量为0.175-0.225mg /kg；免疫结束后采全血制备血清，测定其效价。

4.按权利要求1所述的白色霞水母毒素抗毒血清的制备方法，其特征在于：所述亲和层析纯化为使用pH7.0, 20-50mM Na₂PO₄冲洗层析填料，加入所述获得的兔血清，于4°C摇床过夜，弃上清液，最后使用pH=2.0-3.0,20-50mM甘氨酸洗脱填料，从而得到含白色霞水母毒素特异性免疫球蛋白抗体的抗毒血清。

5.一种权利要求1所述方法制备获得的白色霞水母毒素抗毒血清。