[发明专利]一种用于转染T细胞的培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种用于转染T细胞的培养基，包括如下组分：二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰丝氨酸钠、胆固醇、二价钙盐，所述的二价钙盐为CaCl₂，二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰丝氨酸钠、胆固醇的摩尔比为4:3:3。本发明对急性T淋巴细胞白血病细胞系和小鼠原代T细胞的转染效率高达65％，远高于其他商业化的脂质体转染试剂。

技术领域

本发明属于免疫细胞转染技术领域，具体涉及一种用于转染T细胞的培养基及其应用。

背景技术

免疫细胞由于其特殊的功能和性质难以被常规的脂质体材料递送的DNA或RNA 所影响。无论是质粒过表达、CRISPR敲除或是siRNA沉默，脂质体转染法都无法有效地在免疫细胞中发挥作用，其转染效率往往低于20％。现有技术中较为常用的脂质体转染产品，如Lipofectamine3000、Polyjet,FugeneHD等，无一例外无法对免疫细胞，如巨噬细胞、T细胞、DC细胞等进行有效的转染。

现有技术中较为有效的免疫细胞转染手段主要是病毒转染法和电穿孔转染法两种。病毒转染主要采用慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等进行核酸的递送。病毒转染法对免疫细胞有着较高的转染效率。根据免疫细胞种类的不同，病毒转染法对免疫细胞的转染效率可以达到70％～95％。目前较为先进的CAR-T疗法，就是通过慢病毒转染法在体外对从病人体中分离出的T细胞进行基因改造。然而，病毒的制备步骤繁多，程序复杂，还伴随着难以克服的安全隐患(病毒在制备过程中可感染实验人员)。电穿孔转染法需要用到电穿孔仪，操作简便。但电穿孔法顾名思义需要在细胞表面打孔，这使得使用电穿孔法后细胞的存活率大大降低，而其转染效率也低于病毒转染法。

发明内容

发明目的：本发明要解决的技术问题是提供一种对免疫细胞具有高转染效率的脂质体培养基配方。

本发明还要解决的技术问题是提供上述对免疫细胞具有高转染效率的脂质体培养基配方的应用。

为解决上述技术问题本发明采用如下技术方案：

一种用于转染T细胞的培养基，包括如下组分：二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰丝氨酸钠、胆固醇、二价钙盐。

二油酰基磷脂酰丝氨酸钠有免疫抑制的作用(immnuo-suppressive)，可在进行转染时抑制免疫细胞活性，避免转染复合物过早地被免疫细胞所降解而无法发挥作用。

二油酰基卵磷脂(DOPC，1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)其结构如下：

二油酰基磷脂酰丝氨酸钠(DOPS，1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine sodium salt)其结构如下：

胆固醇(Cholesterol)，其结构如下：

其中，所述的二价钙盐为CaCl₂。

其中，所述的二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰丝氨酸钠、胆固醇的摩尔比为4:3:3。

其中，所述二价钙盐的含量为2mM。

其中，所述所述二油酰基卵磷脂的浓度为4.8nM、二油酰基磷脂酰丝氨酸钠的浓度为3.6mM、胆固醇的浓度为3.6nM。

其中，该配方中包括核酸。

其中，所述核酸为RNA或DNA；

当所述核酸为RNA时，RNA含量为为20～160nM，优选40nM；

当所述核酸为DNA时，DNA含量为40～320nM，优选80nM。