[发明专利]心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法及对cTnI的检测方法

权利要求书

1.心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法，其具体步骤如下：

步骤一：将1mg NH₂-rGO分散在1mL超纯水中，超声处理10min，得到均匀的黑色NH₂-rGO分散液；

步骤二：对裸玻碳电极进行预处理，将预处理好的裸玻碳电极置于2.5％重铬酸钾和10％硝酸的混合溶液中采用恒电位法对其进行氧化处理，使其表面产生-COOH含氧活性基团，恒电位法中的电位为+1.5V，时间为15s；将氧化过的裸玻碳电极置于200μL 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化液中进行活化处理2h，自然晾干后，取10μL 1.0mg/mL的NH₂-rGO滴涂在电极表面并使其自然晾干，从而获得NH₂-rGO/GCE电极；

步骤三：Cu-MOF-74/NH₂-rGO/GCE的制备：配制含20mM Cu(NO₃)₂·3H₂O和0.1M KCl混合溶液作为沉积液，并向此沉积液中通入20min氮气以除去溶液中的氧气，将步骤二所得NH₂-rGO/GCE电极置于除氧后的沉积液中，采用恒电位法在-0.4V条件下对其电沉积70s，电沉积全程需向沉积液中通入氮气以免氧气进入，电沉积之后对电极进行二次水淋洗，晾干，得到Cu/NH₂-rGO/GCE；配制含0.5mM 2,5-二羟基对苯二甲酸的磷酸缓冲盐溶液，通入氮气以除去溶液中的氧气，将Cu/NH₂-rGO/GCE置于2,5-二羟基对苯二甲酸的磷酸缓冲盐溶液中，采用循环伏安法在-1.0V～+1.0V扫描电位区间对其进行20个循环，之后用超纯水淋洗，最后制得Cu-MOF-74/NH₂-rGO/GCE电极；

步骤四：心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器的制备：将步骤三所得Cu-MOF-74/NH₂-rGO/GCE置于200μL活化液中，在活化处理2h之后，将其浸泡在200μL含4μg/mL的anti-cTnI的免疫组化磷酸缓冲盐溶液中，浸泡时间为4h，二次水淋洗，制得anti-cTnI/Cu-MOF-74/NH₂-rGO/GCE；最后将anti-cTnI/Cu-MOF-74/NH₂-rGO/GCE再在200μL 1％的BSA溶液中浸泡2h，二次水淋洗，最终制得BSA/anti-cTnI/Cu-MOF-74/NH₂-rGO/GCE传感器，即为心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器。

2.如权利要求1所述的心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法，其特征在于：步骤二中对裸玻碳电极进行预处理的步骤为：首先用1.0μm、0.3μm、0.05μm的Al₂O₃粉末依次对其进行抛光；然后用乙醇、超纯水对其各超声处理5min；最后用N₂吹干电极表面，备用。

3.如权利要求1所述的心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法，其特征在于：所述活化液为5.0×10^-3mol/L EDC和8.0×10^-3mol/L NHS混合的磷酸缓冲盐溶液。

4.一种如权利要求1所述制备方法制得的心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器对cTnI的检测方法，其特征在于：将心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器分别浸泡在不同浓度的cTnI中50分钟，进而采用差分脉冲伏安法在pH＝6.86的磷酸缓冲盐溶液中对心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器识别不同浓度的cTnI的结果进行电化学检测，差分脉冲伏安法测试参数：扫描电位为-0.4～+0.2V，扫描速率为0.1V/s，电位增量为0.004V，电位幅度为0.05V，脉冲宽度为0.05s，脉冲周期为0.5s。