[发明专利]一种通过酵母发酵获得十三肽的方法及其应用

权利要求书

1.一种通过酵母发酵获得十三肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：配制培养基

1)一级种子培养基用YPD培养基

YPD培养基：将10g酵母提取物，20g蛋白胨，20g葡萄糖，溶于1000mL去离子水中，115℃高压灭菌，备用；

2)发酵表达培养基用BSM培养基

BSM培养基:在1L去离子水中按以下顺序依次分别溶解下列物质：26.7ml85％磷酸85％，18.2g硫酸钾，14.9g七水硫酸镁，0.93g二水硫酸钙，4.13g氢氧化钾；使用25％的氨水调节pH至5.5，添加0.5％的蛋白胨；

步骤2：发酵表达

1)取已鉴定活性的阳性菌落，接种于已经灭菌的200mL YPD培养基的挡板瓶中，在29℃，200rpm的条件下振荡培养24小时，使其在600nm波长处的吸光值达到4-6；

2)在种子菌发酵罐中加入YPD培养基和适量消泡剂，在115℃下，灭菌30min；

3)使用火焰接种法将挡板瓶中的种子液接入到种子菌发酵罐中，调整发酵参数，发酵12h；

4)在诱导表达发酵罐中加入改良BSM培养基和适量消泡剂，121℃，20min灭菌；

5)转接管路高压蒸汽灭菌15min后，将种子发酵罐中的种子液按照1:30的量转入诱导表达发酵罐中，调整发酵参数，开始发酵；

6)发酵6h后开始流加甲醇，发酵,72h后得到发酵产物。

2.根据权利要求1所述的一种通过酵母发酵获得十三肽的方法，其特征在于，所述阳性菌落为带有十三肽表达载体的毕赤酵母菌种。

3.根据权利要求1所述的一种通过酵母发酵获得十三肽的方法的应用，其特征在于，所述步骤2中得到的发酵液与甘草、苦参、金银花、蒲公英和马齿苋的提取物混合，加入甘油、卡波姆和三乙醇胺，可制备成凝胶制剂，所述甘草、苦参、金银花、蒲公英和马齿苋的提取物按质量份数比为1:1:1:1:1。

4.根据权利要求3所述的一种通过酵母发酵获得十三肽的方法的应用：其特征在于，所述凝胶制剂的方法包含以下步骤：

1)将甘草、苦参、金银花、蒲公英和马齿苋的提取物溶解于10倍蒸馏水中，常温下搅拌6-8小时，使其有效成分充分溶于水中；

2)使用过滤设备将上述溶液澄清过滤；

3)将十三肽发酵液按20％比例的添加量与滤液混合，在混合液中加入总质量0.5％的卡波姆，均质10min；

4)接着转入搅拌罐中，加入总质量3％的甘油，高速搅拌；

5)缓慢滴入三乙醇胺，直到pH超过6，卡波姆形成凝胶，得到凝胶制剂。