[发明专利]一种柠檬烯合成酶SynLS2及其应用

说明书

本发明公开了一种柠檬烯合成酶SynLS2及其应用，柠檬烯合成酶SynLS2的氨基酸序列用SEQ ID No.1所示。本发明成功构建了含有该基因的重组表达载体，建立生物合成柠檬烯的方法以NPP为底物合成了柠檬烯。本发明柠檬烯合成酶催化活性高，能够实现柠檬烯在微生物细胞中的合成，有效的降低了生产成本，有利于工业化生产。

技术领域

本发明所属生物医药技术领域，涉及一种柠檬烯合成酶SynLS2及其在生物合成柠檬烯中的应用。

背景技术

柠檬烯(Limonene)化学名为1-甲基-4-(1-甲基乙烯基)环己烯，分子式为C₁₀H₁₆，相对分子量为136。柠檬烯是一种单环单萜，无色液体，且不溶于水，与苯、氯仿、乙醚混溶。自然界中的柠檬烯有两种光学异构体，D-柠檬烯和L-柠檬烯。D-柠檬烯具有抗炎、抑菌、抗癌等多种生理及药理活性，在食品工业、医药卫生领域及日化工业等领域都有着广阔的应用，其需求量也日益增大。

D-柠檬烯广泛存在于柑橘类水果(柠檬、甜橙、葡萄柚等)的果肉和果皮中，目前D-柠檬烯主要通过对柑橘类水果的果肉及果皮进行分离提取获得，其产量及产品质量因受到季节及环境等因素的影响而不稳定。基于此，随着近些年合成生物学和代谢工程技术的快速发展，微生物细胞平台为萜类化合物的合成提供了有效的途径。

微生物细胞合成柠檬烯需要引入外源的柠檬烯合成酶，柠檬烯合成酶能够催化底物合成柠檬烯以及少量其他萜类化合物。但目前，柠檬烯合成酶催化活性不高，生产成本高。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种活性高，生产成本低的柠檬烯合成酶SynLS2。

本发明的第二个目的是提供柠檬烯合成酶SynLS2的应用。

本发明的技术方案概述如下：

一种柠檬烯合成酶SynLS2，其氨基酸序列用SEQ ID No.1所示。

编码一种柠檬烯合成酶SynLS2的基因，所述基因的核苷酸序列用SEQ ID No.2所示。

一种柠檬烯合成酶SynLS2催化底物橙花基焦磷酸合成柠檬烯的应用。

本发明的优点：

本发明提供一种编码柠檬烯合成酶SynLS2的基因和其编码的柠檬烯合成酶SynLS2，并成功构建了含有该基因的重组表达载体，建立生物合成柠檬烯的方法以NPP为底物合成了柠檬烯。本发明柠檬烯合成酶催化活性高，能够实现柠檬烯在微生物细胞中的合成，有效的降低了生产成本，有利于工业化生产。

附图说明

图1为表达载体pNLS2图谱。

图2为菌株ScLim2发酵液和柠檬烯标品的气相色谱图。其中1:柠檬烯标准品；2：ScLim2发酵液。

具体实施方式

本发明所用大肠杆菌菌株E.coliDH5α购买自北京全式金生物技术有限公司。

酿酒酵母菌株CEN.PK2-1C购买自英潍捷基(上海)贸易有限公司。

酿酒酵母菌株yJGZ1来源于已发表文献(JiangGZ,YaoMD,WangY,etal.Manipulation ofGESandERG20forgeranioloverproductioninSaccharomycescerevisiae[J].Metabolic Engineering,2017,41:57-66.)。

LB培养基组成为：10g/L氯化钠、10g/L蛋白胨和5g/L酵母粉，余量为水，0.1Mpa压力121℃下灭菌20min。