[发明专利]一种分离外泌体的方法

权利要求书

1.一种分离外泌体的方法，其特征在于该方法是利用如下原理：

利用亲水性聚合物竞争溶液中的水分子，使外泌体脱水而析出，在析出过程中由于溶液中存在大量的微球，外泌体会优先吸附于微球表面，之后通过洗脱液将外泌体从微球表面脱附，从而实现样品中外泌体的快速稳定提取；

包括如下步骤：

（1）构建反应体系：将微球、结合试剂和预处理后的样品混匀；

（2）孵育：将混匀后的反应体系孵育；然后去除上清液，得到微球-外泌体复合物；

（3）洗脱：加入洗脱液，并将微球-外泌体复合物均匀分散于洗脱液中，洗脱微球上吸附的外泌体；然后去除微球，所得的上清液即为包含外泌体的溶液；

其中结合试剂由亲水性聚合物、盐和pH缓冲液组成；

其中所述亲水性聚合物为聚乙二醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖、聚乙烯亚胺、聚乙烯吡咯烷酮、三甲基甘氨酸中的一种或多种；

其中聚乙二醇分子量在2000~12000；

其中所述的盐为钾盐或钠盐；

所述微球的工作浓度为0.01mg/ml-3mg/ml。

2.根据权利要求1所述的分离外泌体的方法，其特征在于：

其中步骤（1）中，微球粒径在100nm-30μm，表面带有亲水性功能基团，所述的亲水性功能基团为羧基、氨基、羟基或两性离子。

3.根据权利要求1所述的分离外泌体的方法，其特征在于：

其中盐为NaCl，工作浓度范围在0.1-0.4M；其中pH缓冲液为：PBS、Tris-HCl或柠檬酸盐缓冲液。

4.根据权利要求3所述的分离外泌体的方法，其特征在于：

亲水性聚合物最终浓度为30mg/ml-200mg/ml。

5.根据权利要求1所述的分离外泌体的方法，其特征在于：

聚乙二醇的分子量为8000。

6.根据权利要求1所述的分离外泌体的方法，其特征在于：

其中样品为细胞培液、血浆、血清、脑脊液、淋巴液、乳汁、尿液或唾液；

其中预处理是指将样品经过低速差速离心，然后过滤的预处理。

7.根据权利要求6所述的分离外泌体的方法，其特征在于：

对样品的预处理为：对样品进行低速差速离心，包含300g离心5min、2000g离心10min和10000g离心30min；离心之后，用0.22μm滤膜过滤。

8.根据权利要求1所述的分离外泌体的方法，其中洗脱液为PBS、Tris-HCl、柠檬酸盐缓冲液或去离子水。

9.根据权利要求1所述的分离外泌体的方法，其特征在于还包括如下步骤：

二次分离纯化：步骤（3）得到的外泌体溶液作为第二次分离纯化的样品，重复步骤（1）-（3），得到所需的包含外泌体的溶液。