[发明专利]一种基于电阻抗流式检测酵母形态及出芽比例的方法

权利要求书

1.一种基于电阻抗流式检测酵母形态及出芽比例的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

步骤101、培养酵母菌；

步骤102、用缓冲液稀释培养的酵母细胞液；

步骤103、在被检测样本流速、样本液电导率、激励信号频率与幅值等基本参数相同情况下，采用电阻抗流式检测系统采集酵母样本阻抗信号，该系统确保能够让出芽酵母细胞以长轴平行于管道中央液体流动方向的姿态逐个通过检测部位，从而获得与同体积的未出芽酵母更长的通过检测部位的时间，表现在阻抗检测脉冲信号上具有更宽的脉冲宽度；

步骤104、电阻抗流式检测系统对阻抗幅值、相位、电阻、电容、实部、虚部等脉冲信号进行识别，计算并储存每个信号的脉冲高度、脉冲宽度及宽高比，即宽度/高度比值，缩写为R；

步骤105、显微镜下挑选典型出芽酵母，挑选母细胞上有肉眼可见的芽体尚未与母细胞分离、且不与其它细胞粘连的单个细胞认定为典型出芽酵母，通过步骤103和步骤104采集典型的出芽活酵母细胞的脉冲宽度、高度、R等参数的值进行统计；

步骤106、显微镜下挑选典型未出芽酵母，挑选细胞上无肉眼可见的芽体、且不与其它细胞粘连、近似球体的单个细胞认定为典型未出芽酵母，通过步骤103和步骤104采集典型的未出芽活酵母细胞的脉冲宽度、高度、R等参数的值进行统计；

步骤107、对数量相同的典型出芽和未出芽酵母细胞的宽度、高度、R等参数的统计结果进行数值分布对比，确定出芽酵母与未出芽酵母的参数分界阈值；

步骤108、重复步骤101至步骤104，采集被测样本中酵母细胞的脉冲宽度、高度、宽高比R等信息进行统计；

步骤109、根据步骤105至步骤107得到的出芽酵母与未出芽酵母的参数分界阈值，对被测样本酵母细胞的脉冲宽度、高度、宽高比等参数的分布进行统计分析，确定出芽酵母和未出芽酵母的参数范围并据此认定和区分酵母细胞形态，以及出芽酵母、未出芽酵母的数量；

步骤110、计算步骤109确定的出芽酵母数量占采集的该被测样本所有酵母数量的比值，将该比值确定为“出芽比例”。

2.根据权利要求1所述的一种基于电阻抗流式检测酵母形态及酵母出芽比例的方法，其特征在于：分别将具有统计学意义的相同数量的典型出芽酵母和典型未出芽酵母统计所得的脉冲宽度、高度、R平均值之间，两种酵母数量之和最小的脉冲宽度、高度、宽高比R值分别确定为两种酵母形态分界的脉冲宽度、高度、R阈值。

3.根据权利要求1所述的一种基于电阻抗流式检测酵母形态及酵母出芽比例的方法，其特征在于：分别将具有统计学意义的相同数量的典型出芽酵母和典型未出芽酵母集合统计结果所拟合的脉冲宽度、高度、R值分布曲线上，两个峰值之间的脉冲宽度、高度、R值极小值，确定为出芽酵母和未出芽酵母分界的脉冲宽度、高度、R值阈值。

4.根据权利要求2或3所述的一种基于电阻抗流式检测酵母形态及酵母出芽比例的方法，其特征在于：采用被测样本酵母细胞的脉冲宽度、高度、R值统计结果作为分析的依据，分别以脉冲宽度大于宽度阈值、或脉冲高度值大于高度阈值、或R值小于R阈值的酵母细胞认定为出芽酵母，并统计该范围内出芽酵母的数量，计算出芽酵母占被测样本酵母数量的比值，并作为“出芽比例”。

5.根据权利要求2或3所述的一种基于电阻抗流式检测酵母形态及酵母出芽比例的方法，其特征在于：采用被测样本酵母细胞的脉冲宽度、高度、R值统计结果作为分析的依据，分别以脉冲宽度大于宽度阈值且脉冲高度值大于高度阈值，或者脉冲宽度大于宽度阈值且R值小于R阈值，或者脉冲高度大于高度阈值且R值小于R阈值的酵母细胞认定为出芽酵母，并统计该范围内出芽酵母的数量，计算出芽酵母占被测样本酵母数量的比值，并作为“出芽比例”。

6.根据权利要求2或3所述的一种基于电阻抗流式检测酵母形态及酵母出芽比例的方法，其特征在于：采用被测样本酵母细胞的脉冲宽度、高度、R值统计结果作为分析的依据，以脉冲宽度大于宽度阈值且脉冲高度值大于高度阈值且R值小于R阈值的酵母细胞认定为出芽酵母，并统计该范围内出芽酵母数量，计算出芽酵母占被测样本酵母数量的比值，并作为“出芽比例”。