[发明专利]一种AFF细胞的构建方法

权利要求书

1.一种AFF细胞的构建方法，其特征在于，包括由以下步骤：

(1)对外周血进行ctDNA外显子测序，或者以肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点，进行抗原表位预测并合成突变多肽；

抗原表位预测的方法为：以突变的氨基酸位点为中心，向两侧延伸8个氨基酸，将这段17个氨基酸的多肽作为潜在抗原表位；分析潜在抗原表位的IC50，将IC50＜1000nM的潜在抗原表位确定为抗原表位；

(2)将外周血中的树突状细胞，采用TAX-GFP慢病毒进行感染，并选取理想的克隆作为永生DC，用突变多肽对上述永生DC进行负载，并与PBMC共孵育，获得AFF细胞。

2.如权利要求1所述AFF细胞的构建方法，其特征在于，所述外周血也可以是市售工程细胞系。

3.如权利要求2所述的AFF细胞的构建方法，其特征在于，所述工程细胞系为H1299、H226、H358、H1563、H2228、A549、Renca、LLC小鼠Lewis肺癌细胞、CRL-6323 B16F1、CRL-25394T1、U14小鼠子宫颈癌细胞、BV-2小鼠小胶质瘤细胞或G422小鼠神经胶质瘤细胞。

4.如权利要求1所述AFF细胞的构建方法，其特征在于，永生化DC的方法如下：

1)抽取患者外周血100ml；

2)Ficol密度梯度离心分离PBMC；

3)分离树突状细胞，重悬于培养基中；

4)TAX-GFP慢病毒感染所分离的树突状细胞，37℃孵箱静止培养，观察；

5)待细胞克隆化生长后，挑选克隆于96孔板分别培养；

6)单克隆表型分析；

7)选取理想的克隆作为永生DC。