[发明专利]一种用于二十八烷醇预防肝损伤效果的体外评价方法

说明书

本发明提供了一种用于二十八烷醇预防肝损伤效果的体外评价方法，涉及药物评价技术领域，包括以下步骤：(1)用导致肝损伤的药液孵育人正常肝细胞，得到第一孵育肝细胞，测定第一孵育肝细胞的存活率和凋亡率；(2)用二十八烷醇溶液和导致肝损伤的药液共同孵育人正常肝细胞，得到第二孵育肝细胞，测定第二孵育肝细胞的存活率和凋亡率；(3)用步骤(2)所述第二孵育肝细胞的存活率减去步骤(1)所述第一孵育肝细胞的存活率，得到第一差值；(4)用步骤(1)所述第一孵育肝细胞的凋亡率减去步骤(2)所述第二孵育肝细胞的凋亡率，得到第二差值；当所述第一差值≥10％或第二差值≥10％时，二十八烷醇对肝损伤具有预防效果。

技术领域

本发明涉及药物评价技术领域，具体涉及一种二十八烷醇预防肝损伤效果的体外评价方法。

背景技术

肝脏是哺乳动物体内重要器官之一，具有合成、解毒、代谢、分泌、生物转化以及免疫防御等功能。肝脏疾病是目前威胁人类健康的最重要的疾病之一，肝损伤由于其发病原因的普遍性和多样性而在人群中广泛存在，肝损伤会产生很多并发症，包括感染性并发症、肝创面胆漏、继发性出血、急性肝肾肺功能障碍，少数严重患者会导致暴发性或重症肝功能衰竭，死亡率极高。

在药物使用过程中，因药物本身或其代谢产物或由于特殊体质对药物的超敏感性或耐受性降低导致的肝损伤称为药物性肝损伤，多种药物可引起药物性肝损伤，如抗肿瘤的化疗药物、抗结核药、解热镇痛药、免疫抑制剂、降糖降脂药、抗细菌、抗真菌剂抗病毒药等。在美国，成人急性肝衰竭病例中50％以上是由药物引起，其中对乙酰氨基酚(APAP)导致急性肝衰竭最为常见，而且近年来病例还在增加。在我国APAP也被广泛应用于成人和儿童的感冒发热、头痛以及其他疾病所致的发热和疼痛，由药物引起的肝衰竭仅次于肝炎病毒引起的肝衰竭。大部分药物致病机制有相似的地方，APAP导致的急性肝损伤模型可作为最典型的且最容易操作的药物性肝损伤模型。

目前，用于评价药物性肝损伤的评价方法中用的动物模型，建模时间长造价高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于二十八烷醇预防肝损伤效果的体外评价方法。本发明提供的是一种在细胞水平评价预防药物性肝损伤效果的方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种二十八烷醇预防肝损伤效果的体外评价方法，包括以下步骤：

（1）用导致肝损伤的药液孵育人正常肝细胞，得到第一孵育肝细胞，测定第一孵育肝细胞的存活率和凋亡率；

（2）用二十八烷醇溶液和导致肝损伤的药液共同孵育人正常肝细胞，得到第二孵育肝细胞，测定第二孵育肝细胞的存活率和凋亡率；

（3）用步骤（2）所述第二孵育肝细胞的存活率减去步骤（1）所述第一孵育肝细胞的存活率，得到第一差值；

（4）用步骤（1）所述第一孵育肝细胞的凋亡率减去步骤（2）所述第二孵育肝细胞的凋亡率，得到第二差值；

当所述第一差值≥10%或第二差值≥10%时，二十八烷醇对肝损伤具有预防效果；

所述二十八烷醇溶液的浓度为50~200ug/mL；

所述导致肝损伤的药液的浓度为8~20mmol/L；

所述第一孵育肝细胞中的人正常肝细胞的种类、数量和孵育的条件与第二孵育肝细胞中人正常肝细胞相同；

所述步骤（3）和（4）之间无时间顺序限定。

优选地，所述人正常肝细胞的数量为1×10⁵~1×10⁶个/mL。

优选地，所述人正常肝细胞包括HL-7702细胞。