[发明专利]一种测定人血浆中两种抗肿瘤药物浓度的HPLC-MSMS方法

说明书

本发明公开了一种测定人血浆中两种抗肿瘤药物及代谢产物和代谢酶活性相关内源性物质浓度的方法，包括预处理及分别以伏立康唑和溴尿嘧啶为内标，经预处理后样本均使用高效液相色谱分离上清液中的药物成分，然后使用高分辨质谱多反应监测模式进行药物靶向性检测，并进行定量，实现对血浆中两种抗肿瘤药物及代谢产物和代谢酶活性相关内源性物质浓度进行分析测定。本方法在具有快捷性的同时，兼具极高的靶向性，表现出快速、高通量、高灵敏度、特异性强、精密度和准确度良好、稳定性好、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应等优点。本方法可用于临床上伊立替康及其代谢产物和氟尿嘧啶及其代谢酶活性相关内源性物质的血药浓度监测。

技术领域

本发明涉及血药监测技术领域，具体地说，是一种测定人血浆中两种抗肿瘤药物及代 谢产物和代谢酶活性相关内源性物质浓度的HPLC-MSMS方法。

背景技术

临床上常使用伊立替康联合氟尿嘧啶和亚叶酸钙作为结直肠癌的一线用药。临床应用 实践中发现，患者对氟尿嘧啶的耐受存在明显的差异，而其用药后毒副反应轻重与患者体 内氟尿嘧啶代谢相关的二氢嘧啶脱氢酶(DPD)活性相关。DPD酶活性可通过测定人体内 源性尿嘧啶(U)及二氢尿嘧啶(UH2)的浓度，并计算其比值UH2/U得出。

伊立替康(CPT-11)是一种半合成喜树碱衍生物，其在体内经羧酸酯酶代谢成主要活 性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)，SN-38活性比CPT-11强100-1000倍。SN-38经肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶生成葡萄糖醛酸化SN-38(SN-38G)。当SN-38G分泌 进入肠道，肠道中β-葡萄糖醛酸酶又使之变回SN-38，存在肝肠循环。故伊立替康的药物 不良反应与SN-38及SN-38G血药浓度密切相关。

为了保证治疗效果和避免毒副反应，临床上需监测伊立替康、SN-38、SN-38G、氟尿嘧啶血药浓度并测定内源性尿嘧啶及二氢尿嘧啶，以制定个体化给药方案。

迄今为止，研究人员通过不同方法分别测定上述两种抗肿瘤药物及代谢产物和两种内 源性物质的浓度，方法主要包括高效液相色谱法和质谱法。这些方法检测标准不统一，方 法不一致，导致同一患者同一份血浆样品可能需要用不同方法甚至用不同仪器进行检测。 不仅增加了工作量浪费了实验资源，还浪费了大量患者血样，增加了患者等待时间。

因此，有必要建立一种能够同时应用于上述两种药物及其代谢产物和两种内源性物质 的方法，以减少实验成本、降低临床样本使用量以及减少患者等待时间。同时，有利于不 同检测点或者实验室的数据互相参考和使用。

文献：氟尿嘧啶血药浓度检测方法的建立及其临床应用(何光照1，2薛宏波1杨全良 1毕延智1雷凯2张程亮2(1.常州市肿瘤医院，江苏常州213032；2.华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部))记载了一种氟尿嘧啶血药浓度检测方法，通过使用AgelaInnovalNH2色谱柱(2.1mm×50mm，5μm)，使用甲醇-超纯水(2∶98)为流动相等度 洗脱，流速为0.3ml·min－1，柱温为40℃。5-Fu和内标5-溴尿嘧啶在负离子电喷雾电离 模式下的定量离子对分别为m/z128.8→42.1和m/z188.6→42.1(内标5-溴尿嘧啶)。根 据“生物样品定量分析方法验证指导原则(中国药典2015年版四部)”对该方法进行验证。 结果:5-Fu浓度在10～1000ng·ml－1范围内线性良好，定量下限为10ng·ml－1。在线性 范围内精密度、准确度、基质效应、稳定性均符合生物样品分析的要求。但该文献记载的 方法仅能用于监测血药中氟尿嘧啶的浓度，且最终的数据结果表明，该方法测得效果没有 本发明的方法测得的效果佳。本发明的方法具有靶向性高、快速、高通量、高灵敏度、特 异性强、精密度和准确度良好、稳定性好、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应的 优点。可用于临床上伊立替康及其代谢产物和氟尿嘧啶及其代谢酶活性相关内源性物质的 血药浓度监测。关于本发明一种测定人血浆中两种抗肿瘤药物及代谢产物和代谢酶活性相 关内源性物质浓度的HPLC-MSMS方法目前还未见相关报道。

发明内容