[发明专利]一种氨基酸衍生化方法及其应用

说明书

本发明涉及氨基酸检测方法技术领域，尤其涉及一种氨基酸衍生化方法及其应用。本发明公开了一种氨基酸衍生化方法，包括以下步骤：将pH值为9的氨基酸溶液加入到4‑硝基苯甲酰氯溶液中进行震荡反应，得到衍生化的氨基酸。该衍生化方法中的衍生化剂4‑硝基苯甲酰氯的硝基处于对位，能减少位阻的影响，提高衍生化的效率，另外，该衍生化过程简单快速，操作简单，衍生化时间短。该衍生化方法得到衍生化氨基酸无需萃取分离，可以直接进行定性定量测试。由实验数据可知，衍生化的氨基酸直接采用常规的色谱柱结合多反应监测模式的液相色谱‑三重四级杆质谱进行测定，具有良好的响应，且灵敏高，选择性好。

技术领域

本发明涉及氨基酸检测方法技术领域，尤其涉及一种氨基酸衍生化方法及其应用。

背景技术

氨基酸是既含氨基(-NH₂)又含羧基(-COOH)的有机化合物的统称，是构成蛋白质的基本单位，一些蛋白酶的活性是影响植物代谢快慢的重要因素。氨基酸作为烟叶中的初级和次级代谢产物，在陈化、降解的过程中与糖类物质也会发生酶棕化反应生成糖-氨基酸复合物，其复合产物经过进一步的降解会生成酮类、呋喃类、吡咯类、有机酸等多种致香成分，氨基酸也会直接降解生成羰基类的致香成分，从而影响烟叶的品质。

氨基酸常用液相色谱法进行检测，但因为氨基酸无紫外和荧光吸收，形成碎片离子的响应弱等，通过柱前衍生的方式可以改变目标物的极性，提高离子的响应，从而实现快速分离。但现有的氨基酸衍生化方法衍生化时间长，还需对衍生化后的样品进行萃取分离等，衍生化过程繁琐。

发明内容

本发明提供了一种氨基酸衍生化方法，解决了现有的氨基酸衍生化方法衍生化时间长，还需对衍生化后的样品进行萃取分离等，衍生化过程繁琐的问题。

其具体技术方案如下：

本发明提供了一种氨基酸衍生化方法，包括以下步骤：

将pH值为9的氨基酸溶液加入到4-硝基苯甲酰氯溶液中进行震荡反应，得到衍生化的氨基酸。

上述氨基酸衍生化反应原理如下：

本发明提供的氨基酸衍生化方法中的衍生化剂4-硝基苯甲酰氯的硝基处于对位，能减少位阻的影响，提高衍生化的效率，而且4-硝基苯甲酰氯价格低廉，方便易得。另外，利用该衍生化试剂衍生化完成后可直接进行测定，多余的衍生化试剂不影响后续氨基酸衍生产物的定量测定。该衍生化过程简单快速，操作简单，衍生化时间短。该衍生化方法得到衍生化氨基酸无需萃取分离，可以直接进行定性定量测试。

本发明中，所述震荡反应后，得到所述衍生化的氨基酸前，还包括：过滤。

优选地，所述震荡反应的时间为1～20min，更优选为1min，温度为20-45℃。

本发明中，室温下即可完成衍生化反应。

优选地，所述4-硝基苯甲酰氯溶液的浓度为10～100mg/L，更优选为10mg/L；

所述氨基酸溶液的浓度为10～1000μg/L，更优选为10μg/L。

本发明中，pH值为9的缓冲溶液制备方法为：将NH₄HCO₃溶于超纯水中，加入氨水溶解，使溶液的pH值为9。

本发明中，衍生化反应只需在pH值为9缓冲溶液中进行，不需在反应结束时调节酸碱度。

优选地，所述4-硝基苯甲酰氯溶液的溶剂为无水乙腈或吡啶(弱碱性溶剂中)，更优选为无水乙腈。

优选地，所述氨基酸溶液中的氨基酸为20种天然的L-型氨基酸。

本发明还提供了上述氨基酸衍生化方法在烟叶氨基酸检测中的应用。