[发明专利]一种甲醇蛋白发酵液中酶制剂的生产方法

说明书

本发明涉及甲醇蛋白发酵液中酶制剂的生产方法，可有效解决除菌效果好、资源利用率高、环境友好，生产的产品纯度高、性质稳定和安全卫生的问题，采用了碟片高速离心分离、隔膜压滤、超滤浓缩、微滤除菌及密闭式罐体，充分利用各设备的优势，酶制剂液体在整个生产过程中均处于密闭状态，在发酵液轻重相分离、酶液浓缩、除菌除杂、浓缩废液综合利用效果显著，有利于提高酶制剂生产效率，提升酶制剂产品的纯度和品质，符合食品卫生要求，有效解决了除菌效果好、资源利用率高、环境友好，生产的产品纯度高、性质稳定和安全卫生的问题，是甲醇蛋白发酵液中酶制剂生产上的创新，有显著的经济和社会效益。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，特别是一种甲醇蛋白发酵液中酶制剂的生产方法。

背景技术

甲醇蛋白是一类以甲醇和无机盐为主要原料经液态通风发酵生产的单细胞蛋白，以毕赤酵母为菌种经过以上发酵过程制得的蛋白就是甲醇蛋白的一种。将表达产生酶制剂分子的目的基因通过基因工程手段构建成毕赤酵母工程菌，通过微生物发酵，可以在生产甲醇蛋白的同时联产酶制剂（见专利号：ZL 201510667433.7一株同时生产甲醇蛋白和脂肪酶的毕赤酵母及其应用及ZL 201510667645.5一株同时生产甲醇蛋白和木聚糖酶的毕赤酵母及其应用），常见的有脂肪酶、木聚糖酶、蛋白酶等。在实际生产中可从发酵醪中分离酵母菌体和清液，将酵母菌体喷雾干燥后制得单细胞蛋白，清液经一系列提取工艺制得某种特定的酶制剂。

甲醇蛋白发酵液中酶制剂的生产工艺水平决定了酶制剂最终产品的有效成分的纯度、含量、卫生程度、产品质量及产品稳定性，最终影响酶制剂产品应用范围、生产效率、生产过程中的环境保护等方面。因此，加强酶制剂生产工艺的研究和开发，对酶制剂产业的发展有着重要的价值。

传统酶制剂生产工艺为：发酵液中加入硅藻土、珍珠岩等助滤剂后经板框压滤，过滤产生的滤饼弃用，过滤出的清液进行超滤浓缩，其中超滤透过液弃用，超滤浓缩液在加入保护剂后喷雾干燥，得到酶制剂成品。但该生产工艺在实际应用中存在许多缺陷：（1）在板框过滤过程中为增加过滤速度会加入大量的助滤剂，过滤时菌体和助滤剂紧密压缩在一起形成滤饼，难以分离，无法对菌体进行进一步利用；大量料液完全通过板框过滤，会产生大量的滤饼，卸滤饼操作会耗费大量的人力、物力。另外，滤饼作为废渣处理不仅加大了环保压力、增加了投入，而且造成了资源的浪费；（2）常规超滤浓缩设备在操作完成后尚有大量酶液残留在设备及相关管道内，常规的顶洗操作难以准确控制顶水量、对最终浓缩酶液的酶活造成偏差；（3）传统工艺除菌效果差、酶液澄清度差、产品含杂质较多。另外在料液处理过程中，相关罐体处于开放状态，易受空气中杂菌污染，难以达到食品级卫生要求。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种甲醇蛋白发酵液中酶制剂的生产方法，可有效解决除菌效果好、资源利用率高、环境友好，生产的产品纯度高、性质稳定和安全卫生的问题。

本发明解决的技术方案是，一种甲醇蛋白发酵液中酶制剂的生产方法，包括以下步骤：

（1）、将重量浓度为350-450g/L的甲醇蛋白发酵液A在20-30℃下用碟片式高速离心机（GEA公司生产，型号为 HFC 15-01-177）进行第一次分离，离心机转速9000-11500rpm、离心力13000-18000×g、进料速度1.5-2m³/h，分别获得重相液B和轻相液C，重相液B和轻相液C体积比为1:1，重相液B的重量浓度为697-899g/L，轻相液C的重量浓度为1-3g/L；

（2）、向步骤（1）得到的重相液B中加入1-2倍体积的脱盐水进行稀释，得到菌液D；将菌液D在20-30℃下输送至碟片式高速离心机进行二次离心分离，离心机转速9000-11500rpm，离心力13000-18000×g，进料速度1.5-2m³/h，经过二次离心分离，将菌体残余酶液被洗脱，分别获得重相液E和轻相液F，重相液E和轻相液F体积比为1:1-1:2，重相液E的重量浓度为694-898g/L，轻相液F的重量浓度为1-3g/L；