[发明专利]一种拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法

说明书

本发明涉及药材鉴别技术领域，特别涉及一种拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法，以绿原酸、3,5‑O‑二咖啡酰奎宁酸和4,5‑O‑二咖啡酰奎宁酸三个成分作为区分物质。本发明的方法简单易操作，分析时间短，准确率高，达到100%，是一种适合推广使用的方法。

技术领域

本发明涉及药材鉴别技术领域，特别涉及一种拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法。

背景技术

拳参为蓼科植物拳参Polygonum bistorta L.的干燥根茎。呈扁长条形或扁圆柱形，弯曲，有的对卷弯曲，两端略尖，或一端渐细，长6～13cm，直径1～2.5cm。表面紫褐色或紫黑色，粗糙，一面隆起，一面稍平坦或略具凹槽，全体密具粗环纹，有残留须根或根痕。质硬，断面浅棕红色或棕红色，维管束呈黄白色点状，排列成环。气微，味苦、涩。珠芽蓼为蓼科植物珠芽蓼Polygonum viviparnm L.的干燥根茎。草血竭为蓼科蓼属植物红茎蓼Polygonum paleaceum Wall.的干燥根茎。三者同为廖科植物，珠芽蓼和草血竭与拳参的外形特征较为接近。

有文献曾采用显微横切面观察法对三者进行区分，差异不显著；有文献曾采用聚类法对三者水溶性成分的HPLC指纹图谱进行分析，可以进行适当区分，但是对于样本量的要求过于严格；有文献曾采用HPLC-MS-MS法对三者水溶性成分进行分析，主要成分基本一致，仅存在量的少量差异。各种方法效果均不理想。

按照现行的《中国药典》2015年版一部进行检验，性状、显微鉴别、没食子酸的薄层鉴别及 HPLC法含量测定均无法对三者进行有效区分，造成市场上珠芽蓼和草血竭代替拳参使用的现象比较普遍。造成这种问题出现的原因，主要是上述检验项目专属性不强。所以，找到拳参与珠芽蓼、草血竭具有差异的检测成分，才能进行有效鉴别。

发明内容

为了解决以上现有技术中拳参药材检验方法中存在的问题，将拳参与珠芽蓼、草血竭进行有效区分，本发明公开了一种检验准确度高、方法简便的拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法。考虑到目前对极性较大的水溶性成分的研究普遍效果不理想，本发明将研究方向进行了调整，以极性较低成分进行研究，选定的样品提取条件和色谱条件主要针对该类成分。

高效液相色谱法(配二极管阵列检测器)可以实现对拳参低极性成分进行分离，并实现拳参与珠芽蓼、草血竭的有效鉴别。高效液相色谱可以对样品所含的不同化学成分先进行分离，二极管阵列检测器可以进行光谱图的比较，配合使用以达到鉴别的目的，并保证结果的准确性。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法，将待测样品粉碎，使用有机溶剂提取后，采用高效液相色谱仪进行检测，若检出绿原酸成分，未检出3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和 4,5-O-二咖啡酰奎宁酸两个成分，则待测样品为拳参；若同时检出绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸三个成分，则待测样品为珠芽蓼或草血竭。

在差异成分3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸的筛选及确认过程中进行了大量的工作。由于拳参主要含有没食子酸和鞣质类成分，目前关于拳参的成分研究工作主要为水溶性成分的研究。鉴于拳参、珠芽蓼、草血竭中水溶性成分差异不明显，我们创新性地对三种药材的脂溶性成分进行了研究。

经过反复对比试验，采用低极性溶剂，对拳参、珠芽蓼、草血竭的脂溶性成分进行提取，采用高效液相色谱法进行分离，得到三种药味的脂溶性成分特征图谱。通过对特征图谱的分析比对，得到三种药味的差异性成分，并进一步采用高效液相色谱-质谱联用仪对差异性成分进行鉴定。通过质谱解析以及对照品比对，最终确认差异成分为3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸。