[发明专利]一种微量细胞的透射电镜包埋法

说明书

本发明公开一种微量细胞的透射电镜包埋法，包括以下步骤：将1.5ml的EP管中的细胞漂洗后进行离心；在室温下向EP管中加入戊二醛对细胞进行固定后，对细胞进行漂洗，离心后弃上清；向EP管中加入锇酸对细胞进行固定，对细胞进行漂洗，离心后弃上清；对细胞进行脱水；使用Spurr包埋剂与丙酮对细胞浸透，然后对细胞离心；使用纯Spurr包埋剂对细胞浸透，然后对细胞离心；将细胞转入至0.5ml的EP管中，并将0.5ml的EP管放入至盛有热水的1.5ml的EP管中，对细胞进行离心；取出0.5ml的EP管，分别放置在37℃以及60℃的环境。本发明离心后的细胞集中成块比较牢固，近似于组织块，便于包埋切块。

技术领域

本发明属于医疗技术领域，更具体地，涉及一种微量细胞的透射电镜包埋法。

背景技术

微量细胞数量比较少，常规透射电镜样品的固定、脱水、浸透，每步都需要离心。浸透剂和包埋剂通常采用环氧树脂Epon812与硅胶包埋模进行包埋。由于Epon812粘度较高，细胞不易集中，无法进行超薄切片。

发明内容

本发明为克服上述现有技术细胞不易集中的缺陷，提供一种微量细胞的透射电镜包埋法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种微量细胞的透射电镜包埋法,包括以下步骤:

S1:将细胞收集在1.5ml的EP管中,用生理盐水或0.1M的PBS对细胞进行漂洗,然后将EP管中的细胞在2000r/min的转速下离心3min；

S2：在室温条件下向EP管中加入3％的戊二醛对细胞进行固定，固定时间为30min；加入戊二醛后禁止摇动细胞，以免细胞分散后不成团块；使用0.1M的PBS对细胞进行漂洗，然后将EP管中的细胞在2000r/min的转速下离心3min，弃上清；

S3：在室温条件下向EP管中加入1％的锇酸对细胞进行固定，固定时间为30min；使用PBS对细胞漂洗，然后对EP管中的细胞在2000r/min的转速下离心3min，弃上清；

S4：利用50％乙醇、70％乙醇、80％丙酮、90％丙酮、95％丙酮、100％丙酮对细胞进行脱水；

S5:在室温条件下，使用Spurr包埋剂与丙酮按1:1的比例对细胞浸透，时间为30min；然在对EP管中的细胞在2000r/min的转速下离心3min；

S6:使用纯Spurr包埋剂对细胞浸透，时间为40min，然后对EP管中的细胞在2500-3000r/min的转速下离心3-4min；

S7：将细胞转入0.5ml的EP管中，在60℃的环境下放置5min；在1.5ml的EP管的底部放入一定量的棉花和60℃的热水；将0.5ml的EP管套入1.5ml的EP管中；然后对1.5ml的EP管、0.5ml的EP管以及0.5ml的EP管中的细胞在2500-3000r/min的转速下离心5min；热水的作用是降低包埋剂的粘度，便于细胞的离心沉淀；在0.5ml的EP管套入1.5ml的EP管中，棉花对0.5ml的EP管的起到一定的支撑固定作用，防止在离心过程中，0.5ml的EP管在1.5ml的EP管中出现转动等问题，从而影响离心的效果；

S8：将0.5ml的EP管从1.5ml的EP管中取出；将0.5ml的EP管在37℃的环境下放置4小时，然后将0.5ml的EP管在60℃的环境下放置60小时；

S9：用刀片将装有包埋块的0.5ml的EP管外套切开，取出包埋块。

优选地，在所述步骤S1中，PBS的ph值为7.2；漂洗次数为2次，每次漂洗时间为1min。

优选地，在所述步骤S2中，PBS的ph值为7.2，漂洗次数为2次，每次漂洗时间为5min。