[发明专利]一种以芽为外植体的亚美马褂木的快繁方法

权利要求书

1.一种以芽为外植体的亚美马褂木的快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采集顶芽或侧芽作为外植体，预处理和消毒；

(2)将步骤(1)预处理和消毒后的获得的外植体接种到初代培养基中培养，其中，所述初代培养基以MS培养基为基础，添加有1.0～3.0mg/L 6-BA、0.3～1.0mg/L NAA和0.1～0.5mg/L IBA；

(3)将初代培养得到的愈伤嫩芽转入继代培养基中培养，其中，所述继代培养基以3/4MS培养基为基础，添加有0.5～2.0mg/L 6-BA、0.1～0.5mg/L IBA和0.1～0.5mg/L KT；

(4)将继代培养得到的丛生芽转入壮苗培养基中培养，其中，所述壮苗培养以MS培养基为基础，添加有0.3～1.0mg/L 6-BA、0.1～0.5mg/L IBA和0.1～0.3mg/L KT；

(5)将壮苗培养得到的不定芽转入生根培养基中培养，其中，所述生根培养基以1/2MS培养基为基础，添加有0.1～0.3mg/L IBA和0.1～0.3mg/L NAA；

(6)将生根培养得到的组培苗洗净根部培养基，移栽至炼苗的基质中炼苗，得到小苗。

2.权利要求1所述以芽为外植体的亚美马褂木快繁方法，其特征在于，步骤(2)中初代培养基以MS培养基为基础，添加有2.0mg/L 6-BA、0.5mg/L NAA、0.1mg/L IBA和5.0mg/LVC。

3.权利要求1所述以芽为外植体的亚美马褂木快繁方法，其特征在于，步骤(3)中继代培养基以3/4MS培养基为基础，添加有1.0mg/L 6-BA、0.5mg/L IBA、0.3mg/L KT和5.0mg/LVC。

4.权利要求1所述以芽为外植体的亚美马褂木快繁方法，其特征在于，步骤(4)中壮苗培养基以MS培养基为基础，添加有0.5mg/L 6-BA、0.3mg/L IBA、0.1mg/L KT和5.0mg/L VC。

5.权利要求1所述以芽为外植体的亚美马褂木快繁方法，其特征在于，步骤(5)中生根培养基以1/2MS培养基为基础，添加有0.2mg/L IBA、0.1mg/L NAA和5.0mg/L VC。

6.根据权利要求1所述的以芽为外植体的亚美马褂木快繁方法，所述的亚美马褂木包括XY1、XY2和T8三个基因型。

7.根据权利要求1所述以芽为外植体的亚美马褂木快繁方法，步骤(1)中处理和消毒的方法为：采集的外植体4℃冰箱放置1-2d，洗洁精清洗外植体2次，剥去芽最外一层苞片，用稀释的84消毒液浸泡5-10min，置于锥形瓶中，用一层纱布扎好，放置自来水下流水冲洗2-4h，转移至超净工作台。将流水冲洗过的外植体放入提前灭好菌的锥形瓶中，先用高压灭菌的冷却的无菌水摇晃清洗2遍，用75％浓度的酒精浸泡30s，浸泡完再用无菌水清洗1次，用0.1％浓度的升汞消毒，消毒时间设定为5～20min；升汞消毒期间保持锥形瓶震荡晃动，使升汞充分与材料接触；最后用无菌水清洗5-6次，每次5min，将残留的升汞尽可能的祛除干净；将处理完毕的外植体用无菌滤纸吸干水分。

8.根据权利要求1所述一种以芽为外植体的亚美马褂木的快繁方法，其特征在于，步骤(6)中炼苗移栽基质为灭菌完成的草木灰、珍珠岩、蛭石按照7∶2∶1的比例混合，加入营养液混合搅拌均匀。