[发明专利]一种肉眼直接计数H9N2禽流感病毒的方法

权利要求书

1.M13@GNP指示探针，其特征在于，所述M13@GNP指示探针为蛋白G包被的金纳米颗粒与M13单克隆抗体及H9N2单克隆抗体结合，再与M13噬菌体结合形成。

2.权利要求1所述的M13@GNP指示探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

金纳米颗粒的清洗：将包被有蛋白G的金纳米颗粒进行清洗获得分散性较均一的纳米材料；

抗体的偶联：将M13单克隆抗体和H9N2抗体和步骤（1）中清洗后的金纳米颗粒混合进行亲和偶联，常温孵育1-6 h；离心去除未结合的抗体，用含BSA的PBS溶液洗涤后重悬于PBS溶液中，得到GNP探针；

M13@GNP指示探针的制备：取步骤（2）中GNP探针与M13噬菌体混合，室温下孵育，经过离心处理后将沉淀重悬于PBS中，得到M13@GNP探针。

3.根据权利要求2所述的M13@GNP指示探针的制备方法，其特征在于，所述步骤1）的金纳米颗粒粒径为15 nm。

4.根据权利要求2所述的M13@GNP指示探针的制备方法，其特征在于，所述步骤3）M13噬菌体的浓度为10¹¹-10¹³PFU/mL。

5.权利要求1所述的M13@GNP指示探针在计数H9N2禽流感病毒中的应用。

6.一种肉眼直接计数H9N2禽流感病毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

将H9N2单克隆抗体跟包被有蛋白A的磁纳米颗粒偶联，构建能够特异性结合H9N2流感病毒的磁探针；

将步骤a）构建的磁探针与待测样品混合捕获待测样品中的H9N2流感病毒，加入PBS重悬磁探针得到溶液；

将权利要求1所述的M13@GNP指示探针与步骤b）得到的溶液混合，作用30-60min后经磁力架分离，PBS重悬后，重悬液与M13宿主菌ER2738共同涂布于含有IPTG/X-Gal的LB的琼脂板上，计数蓝斑数。

7.根据权利要求6所述的一种肉眼直接计数H9N2禽流感病毒的方法，其特征在于，所述步骤a）中的H9N2单克隆抗体与包被有蛋白A的磁纳米颗粒的质量比为1:1-2:5。

8.根据权利要求6所述的一种肉眼直接计数H9N2禽流感病毒的方法，其特征在于，所述步骤a）中偶联时间为1-6 h。

9.根据权利要求6所述的一种肉眼直接计数H9N2禽流感病毒的方法，其特征在于，所述步骤b）获待测样品为禽喉拭子、泄殖腔拭子或脏器组织中的一种。

10.根据权利要求6所述的一种肉眼直接计数H9N2禽流感病毒的方法，其特征在于，所述步骤b）磁探针捕获H9N2禽流感病毒的时间为30-60min。