[发明专利]一种神经干细胞微囊泡及其应用

说明书

本发明涉及一种神经干细胞微囊泡及其应用，属于生物材料及应用技术领域；本发明提供的微囊泡来源于神经干细胞，所述微囊泡特异性表达并能递送蛋白HSP‑70；本发明通过实验证明了所述神经干细胞微囊泡在制备治疗心肌细胞凋亡引起疾病如心肌再灌注损伤药物中的应用，上述应用是通过神经干细胞来源的微囊泡通过递送HSP‑70来增加心肌细胞HSP‑70的含量，而有效抑制心肌细胞凋亡；使用本发明所述的微囊泡治疗心肌再灌注损伤不仅具有干细胞治疗同样的作用，而且还避免干细胞治疗过程中比如肿瘤形成、免疫抑制、成活率低等问题。同时仍然提供生长因子、非编码RNA和其他细胞保护因子，帮助修复和再生受损细胞或组织。

技术领域

本发明涉及一种神经干细胞微囊泡及其应用，属于生物材料及应用技术领域。

背景技术

缺血性心脏病（又称冠心病）是全球致死和致残的最主要原因之一。及时再灌注是缺血性心脏病的目前最有效的治疗方法，不仅可以减少梗塞面积，还可以预防心力衰竭，但再灌注过程本身可以诱导心肌细胞死亡，这被称为心肌再灌注损伤。心肌再灌注损伤是由活性氧过量产生，能量代谢紊乱，中性粒细胞浸润，钙超载和血管内皮功能障碍引起的，目前仍然没有有效的治疗方法。干细胞移植疗法被认为是治疗心肌再灌注损伤的一种有效方法，主要通过释放自分泌和旁分泌因子来改善受损组织。然而，诸如畸胎瘤形成，免疫应答，难以获得大量细胞以及有限的细胞增殖和分化等主要问题阻碍了这些细胞作为临床治疗选择的常规使用。

目前已有对来源于间质干细胞或者血清的外泌体的功能和应用的相关研究，但是对微囊泡的研究不多，不同来源的微囊泡或外泌体表达的特异性蛋白不相同，在功能或应用上也是不同的，目前对神经干细胞来源的微囊泡的功能和应用尚未有披露。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种神经干细胞微囊泡，所述微囊泡特异性表达蛋白HSP-70，并且能递送蛋白HSP-70，增加靶细胞的HSP-70含量。

本发明的另一个目的在于提供一种神经干细胞微囊泡在制备治疗心肌细胞凋亡引起疾病的药物中的用途。

本发明还提供一种神经干细胞微囊泡在制备治疗心肌再灌注损伤药物中的应用。

上述应用是通过神经干细胞来源的微囊泡通过递送HSP-70来增加心肌细胞HSP-70的含量，而有效抑制心肌细胞凋亡来实现。

本发明还提供一种药物，所述药物含有所述的神经干细胞微囊泡。

本发明所述的神经干细胞微囊泡，来源于人胚胎干细胞，其制备方法包括如下步骤：

（1）诱导人胚胎干细胞分化为神经干细胞；

（2）收集第8代到第15代的神经干细胞的上清液；

（3）将收集的神经干细胞上清液以2,000×g离心5min，然后以12,000×g离心15min以除去杂质。之后，将上清以100,000×g离心2小时，用PBS洗涤沉淀物并在相同条件下进行第二次超速离心步骤。随后除去多余的液体并加入200 μL PBS以重悬沉淀，最后用无菌滤膜过滤除菌,分装后在-80℃下储存，并用BCA蛋白质定量试剂盒法进行蛋白质定量检测。

本发明的有益效果：

微囊泡（MV）是其由细胞分泌的脂质双层包裹的纳米囊泡并存在于体液中。细胞微囊泡是许多信号分子的天然载体，包括脂质，蛋白质，DNA，mRNA，miRNA，siRNA和介导细胞的lncRNAs。MV具有长期稳定性和低免疫原性或无免疫应答特性等。