[发明专利]利用双向发酵技术获取灵芝板蓝根生物多糖的方法

说明书

本发明公开了一种利用双向发酵技术获取灵芝板蓝根生物多糖的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：1）药渣粉末处理；2）灵芝菌种活化；3）双向发酵培养基配置；4）双向发酵；5）发酵菌质处理；6）多糖提取。本发明的有益效果：工艺简单，设备要求不高，易于推广；使用中药厂生产的残余废料用于发酵，实现了残渣的再利用，降低了生产成本，提高了经济效益，同时减少了环境的污染；利用双向发酵技术，获取了灵芝和板蓝根生物多糖；采用真空冷冻干燥，最大限度保持多糖活性；提取多糖后的菌渣经过检测，不含活菌，对生物无毒性，生态环保，零残留、零污染。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种利用双向发酵技术获取灵芝板蓝根生物多糖的方法。

背景技术

山东是我国中草药人工种植大省，目前全省中草药种植品种超过70余种，并且是板蓝根、金银花 、山楂 、丹参 、黄芩 、西洋参等的主要栽培产区。伴随中草药大规模种植，中草药深加工产业发展迅速，2018年全省中药饮片企业以超过250家。但目前大部分企业中草药有效成分获取方式主要以水浸提为主，获取效率不理想，药渣中仍然残留大量药用成分，并且药渣处理一般采用掩埋，焚烧或者制成有机肥还田，导致药用资源浪费，并且容易引起环境污染。药用资源工厂化生产后的再利用，提高中草药利用效率显得尤为重要，不仅可以降低成产成本，提高经济效益还能减少环境污染；板蓝根(Isatis Tinctoria L.)是一种常用药用植物，全株入药，为十字花科菘蓝的干燥根和大青叶，有清热解毒凉血的功效，用于感冒，微生物感染，高血压，肿瘤等疾病。其主要成分包含生物多糖，生物碱，黄酮类化合物，有机酸等。

灵芝是我国传统名贵真菌，是具有滋补强壮，扶正固本的珍贵药材。实验证明灵芝具有滋补强壮、健脑、消炎、利尿、益肾、抗菌、抗氧化、抗癌、抗肿瘤和提高免疫力等功效。目前研究较多的灵芝化学成分主要有: 三萜类化合物、多糖类、核苷类、甾醇类、生物碱类、呋喃衍生物、氨基酸多肽类、无机元素、脂肪酸等。多糖类化合物是灵芝所含重要的化学成分之一, 现已证明, 灵芝多糖类也具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、降血脂、抗氧化和抗衰老等作用。近年来灵芝多糖需求量不断增大，但是野生灵芝非常稀缺，人工栽培灵芝固体菌种周期在半年以上，使用液体菌种周期也需要100天以上。

双向发酵即用一定的药用菌种接种在一定的基质上，在一定条件下发酵培养，在特定的条件下达到发酵终点，从而在短周期内(7-10天)获得大量菌丝，板蓝根作为培养基可以加快灵芝菌丝生长，缩短发酵时间，发酵产物提取水溶性多糖，即获得了包含灵芝多糖和药性多糖的混合多糖。可作为药与药用真菌的结合实例推广，并开发具有良好功效的药物。目前尚无文献报道上述混合多糖的制备方法。

发明内容

本发明的目的就是针对现有技术存在的缺陷，提供一种利用双向发酵技术获取灵芝板蓝根生物多糖的方法。

其技术方案是：利用双向发酵技术获取灵芝板蓝根生物多糖的方法，该方法包括以下步骤：

1）药渣粉末处理：板蓝根和/或大青叶药渣干燥后切段，磨成粉末；

2）灵芝菌种活化：将灵芝菌种接种到PDA培养基平板活化，25—30℃恒温培养5—10天后，挑取长势良好的菌丝接种到含有20%药渣粉末提取液的PDA固体平板扩大培养5-7天，待菌丝长满平板备用；

3）双向发酵培养基配置：将50 %-100 %的药渣粉末、0-48 %的玉米芯粉末、0-0.5%的MgSO₄、0-0.5% 的(NH₄)₂SO₄和0-1%的KH₂PO₄混合后，调节pH在6.5左右，加入适量的水，使最终浓度为65%，拌匀压实后121℃高压蒸汽灭菌备用，液体培养基为浓度5%-20%药渣粉末水提取液配置的PDA液体培养基；