[发明专利]基于转录因子间的互作关系构建双激素响应启动子的方法

权利要求书

1.基于转录因子间的互作关系构建双激素响应启动子的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）按照实际需要，选择一个天然启动子作为基本骨架，所述天然启动子包括响应激素A诱导的多个顺式作用元件；选择包括响应激素B诱导的顺式作用元件组合成响应元件盒；所述激素A与激素B不相同；

2）将响应元件盒插入所述天然启动子中任一相邻两个顺式作用元件之间，即构建得到所述双激素响应启动子；所述响应元件盒中顺式作用元件结合的转录因子与天然启动子中所述相邻顺式作用元件结合的转录因子之间都存在互作关系；

所述互作关系的判定包括以下步骤：

S1：根据文献或数据库查找每个顺式作用元件结合的转录因子及其编码基因；

S2：将绿色荧光蛋白GFP分成N端部分^NGFP和C端部分^CGFP，在所述N端部分的编码基因的5’末端分别与响应元件盒中顺式作用元件结合的转录因子的编码基因连接，形成不同融合基因片段TF-^NGFP；在所述C端部分的编码基因的5’末端分别与天然启动子中顺式作用元件结合的转录因子的编码基因相连，形成不同的融合基因片段TF-^CGFP；

S3：将任一所述融合基因片段TF-^NGFP和任一所述融合基因片段TF-^CGFP导入同一受体细胞中，得到转基因细胞，然后检测所述转基因细胞是否产生绿色荧光，若所述转基因细胞产生绿色荧光，则所述两个转录因子存在互作关系；若所述转基因细胞不产生绿色荧光，则所述两个转录因子不存在互作关系。

2.根据权利要求1所述基于转录因子间的互作关系构建双激素响应启动子的方法，其特征在于，步骤2）所述插入方式为重叠延伸PCR或同源重组等。

3.根据权利要求1所述基于转录因子间的互作关系构建双激素响应启动子的方法，其特征在于，所述的A激素和B激素可以是存在拮抗关系的激素组合。

4.根据权利要求3所述基于转录因子间的互作关系构建双激素响应启动子的方法，其特征在于，所述响应的激素组合为SA和JA。