[发明专利]一种核酸的免疫层析检测方法、检测试剂盒及其应用

说明书

本发明属于生物医药领域，涉及一种分子检测方法，具体涉及一种核酸的免疫层析检测方法、检测试剂盒及其应用。本检测方法使用报告探针标记目的DNA片段，使用固定化的捕获探针结合被报告探针标记的所述目的DNA片段；所述报告探针和所述捕获探针均包含TALE蛋白，或者仅有报告探针包含TALE蛋白，或者仅有捕获探针包含TALE蛋白。该检测方法利用DNA序列特异性识别蛋白结合双链DNA，从而减少了检测前的DNA变性等复杂操作，缩短了核酸检测的时间并简化了检测操作。本技术方案可以应用到生物样品检验和疾病检测相关试剂盒的制备中。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种分子检测方法，具体涉及一种核酸的免疫层析检测方法、检测试剂盒及其应用。

背景技术

体外诊断是现代检测医学的重要组成部分，体外诊断的临床应用贯穿了疾病预防、初步诊断、选择治疗方案和评价疗效的全过程。分子诊断是精准医疗和精准检测的技术基础，也是体外诊断中增速最快的子行业。分子诊断技术是指以DNA和RNA为诊断材料，用分子生物学技术来检测基因的存在、缺陷或表达异常。分子诊断技术具有对感染初期和基因性疾病检测的独特优势，目前，全球主要的分子诊断技术包括PCR、FISH、基因测序、基因芯片和蛋白芯片。分子诊断技术已广泛应用于传染病的诊断、流行病的调查、食品卫生检查、肿瘤和遗传病的早期诊断及法医鉴定等各个领域。国内外对分子诊断技术的研发方向集中在提高通量、准确定性和定量、降低检测成本和减少检测时间等方面。可视化、便携式的体外诊断方法和试剂盒是个人化医疗的未来发展方向，该技术使得在野外、基层和家庭进行快速核酸检测变为可能。

分子诊断的核心要素之一为对特定DNA或RNA序列进行定性或定量检测，现有技术中，对特定DNA或RNA序列进行定性或定量检测通常是采用聚合酶链式反应(PCR)、实时定量PCR等手段，但上述过程较为耗时并且需要依赖复杂且昂贵的仪器，不便于在野外、基层和家庭等缺少仪器设备的地方进行DNA或RNA序列检测。中国专利CN104614524A(一种宫颈癌HPV快速检测装置的试纸条)公布了技术方案：“一种宫颈癌HPV快速检测装置的试纸条包括底板、样品垫、结合垫、吸收垫，所述底板一端上方为样品垫，底板另一端上方为吸收垫，样品垫一端下方重叠有结合垫，结合垫与吸收垫之间为硝酸纤维素膜垫，硝酸纤维素膜垫上设置有测试线和控制线，测试线和控制线上分别设置有核酸探针。”在上述专利的技术方案中，虽然试纸条便于携带且操作方便，但该技术方案存在如下技术问题：(1)在检测待测核酸样品时，需要将核酸的双链DNA(dsDNA)结构进行变性处理，使得双链结构变为单链结构，单链DNA(ssDNA)才能与试纸上的核酸探针结合，达到检测的目的；(2)核酸探针技术原理是碱基配对，互补的两条核酸单链通过退火形成双链，退火过程对温度等条件有一定要求，因此在使用上述专利的试纸条进行核酸检测时，需保证适宜的退火条件，否则会出现核酸探针不能和目的ssDNA结合的情况；(3)上述技术方案直接使用从生物样本中提取的核酸来进行检测，但如果核酸中目的DNA片段含量过少，试纸条由于其灵敏度的限制，不能够检测出生物样本中的核酸，出现假阴性情况；(4)该技术方案对核酸探针的特异性要求很高，若探针特异性不强，会和非目的DNA片段结合，出现假阳性的情况；(5)该技术方案缺少对待测核酸的纯化步骤，这就会导致探针可能非特异性结合到非目的片段上，出现假阳性的情况。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种核酸的免疫层析检测方法，该检测方法利用DNA序列特异性识别蛋白结合双链DNA(dsDNA)，从而减少了检测前的DNA变性等复杂操作，缩短了核酸检测的时间并简化了检测流程。

为达到上述目的，本发明提出了以下技术方案：

一种核酸的免疫层析检测方法，使用报告探针标记目的DNA片段，使用固定化的捕获探针结合报告探针标记的所述目的DNA片段；所述报告探针和所述捕获探针均包含TALE蛋白，或者仅有报告探针包含TALE蛋白，或者仅有捕获探针包含TALE蛋白。