[发明专利]cDNA的合成方法、靶RNA的检测方法及试剂盒

说明书

本发明涉及cDNA的合成方法、靶RNA的检测方法及试剂盒。本发明的课题在于，提供可以以更高的精度由靶RNA合成及扩增cDNA的手段。通过使用与靶RNA杂交的第1寡核苷酸分子、与该第1寡核苷酸分子杂交的第2寡核苷酸分子和逆转录酶且以靶RNA为模板来合成cDNA，从而解决了上述课题。

技术领域

本发明涉及合成cDNA的方法。另外，本发明涉及检测靶RNA的方法。另外，本发明涉及用于这些方法的试剂盒。

背景技术

近年来，逐渐明确以小分子RNA(miRNA)为代表的低分子的非编码RNA在发生、分化、细胞增殖、细胞凋亡等各种生物学过程中发挥了重要作用。对这类功能性低分子RNA进行检测及定量在阐明生命现象方面非常重要。通常，在RNA的检测中常用的方法是：通过逆转录反应由RNA合成cDNA，利用PCR法对该cDNA进行扩增及检测。但是，miRNA的碱基长度为20碱基左右，较短，因此难以设计与通过逆转录反应得到的cDNA的两端杂交的引物。

作为由miRNA合成cDNA并扩增的方法，已知例如专利文献1及2中记载的方法。专利文献1中公开了：使用在5’侧具有与miRNA不杂交的区域的引物来进行miRNA的逆转录反应，由此合成比miRNA长的cDNA(参照专利文献1的图1)。另外，专利文献2公开了：使用具有作为突出部分的、与miRNA杂交的区域的茎·环结构的引物来进行miRNA的逆转录反应(参照专利文献2的图4)。专利文献2的方法通过在逆转录反应后使引物的茎部分解离而得到比miRNA长的cDNA。专利文献1及2的方法通过使用所得到的cDNA作为模板，从而容易利用PCR进行cDNA的扩增。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：欧州专利第1851336号说明书

专利文献2：美国专利第7575863号说明书

发明内容

发明要解决的课题

本发明人发现，专利文献1及2的方法在由低分子RNA合成cDNA及扩增的灵敏度及特异性方面有改善的余地。本发明的目的在于，开发可以以更高的精度由靶RNA合成及扩增cDNA的手段。

用于解决课题的手段

因此，本发明提供一种将靶RNA、第1寡核苷酸分子、第2寡核苷酸分子和逆转录酶混合并以该靶RNA为模板来合成cDNA的方法。在该方法中，第1寡核苷酸分子在3’末端具有与靶RNA杂交的第1区域、在第1区域的5’侧具有与第2寡核苷酸分子杂交的第2区域。

本发明提供检测靶RNA的方法，其包含：将靶RNA、第1寡核苷酸分子、第2寡核苷酸分子和逆转录酶混合并以该靶RNA为模板合成cDNA的工序；对该cDNA进行扩增并检测扩增产物的工序。在该方法中，第1寡核苷酸分子在3’末端具有与靶RNA杂交的第1区域、在第1区域的5’侧具有与第2寡核苷酸分子杂交的第2区域。

本发明提供一种试剂盒，其包含：与靶RNA杂交的第1寡核苷酸分子、和与该第1寡核苷酸分子杂交的第2寡核苷酸分子。在该试剂盒中，第1寡核苷酸分子在3’末端具有与靶RNA杂交的第1区域、在第1区域的5’侧具有与第2寡核苷酸分子杂交的第2区域。

【发明的效果】

根据本发明，可以以更高的精度由靶RNA合成及扩增cDNA。

附图说明

图1是示出利用本实施方式的合成方法合成及扩增cDNA的反应原理的示意图。

图2A是示出本实施方式的试剂盒的外观的一例的图。

图2B是示出本实施方式的试剂盒的外观的一例的图。

图2C是示出本实施方式的试剂盒的外观的一例的图。