[发明专利]一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂有关物质的分析方法

说明书

本发明提供了一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂有关物质的分析方法，该方法可以准确测定化合物T供试品中杂质化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和化合物IX的含量，且溶剂不干扰杂质检测，方法专属性良好。该检测方法简便﹑快速﹑准确﹑灵敏度高﹑重复性好﹑准确度好，适合工业化生产使用。

技术领域

本发明属于药物分析领域，涉及一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂有关物质的高效液相色谱分析方法。

背景技术

9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)(化合物T)是吉利德研发的一种新型抗乙肝病毒药物，已经于2016年11月10日获得美国FDA批准。化合物T存在多个手性中心，因此供试品中有关物质种类繁多，需寻找一种新的、简单快速的能够同时检测化合物T有关物质的分析方法。

发明内容

一方面，本发明提供了化合物9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)有关物质的分析方法，其特征在于：所述方法是高效液相色谱法，该方法采用反相色谱柱，流动相A选自磷酸盐缓冲液、四氢呋喃和乙腈中一种或两种以上的组合，流动相B选自磷酸盐缓冲液、四氢呋喃和乙腈中一种或两种以上的组合，按照等度或梯度洗脱。

在一些实施方案中，所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸钠缓冲溶液、磷酸钾、磷酸铵缓冲溶液；在一些优选的实施方案中，所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸钾缓冲溶液。

在一些实施方案中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01～0.1mol/L；在一些典型的实施方案中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01～0.05mol/L；在一些更为典型的实施方案中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.02mol/L。

在一些实施方案中，所述流动相A为磷酸钾缓冲液-四氢呋喃-乙腈的组合，流动相B为磷酸钾缓冲液-四氢呋喃-乙腈的组合，按照等度或梯度洗脱；在一些典型的实施方案中，所述流动相A为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为900～1100:1～20:1～20的混合溶液，流动相B为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为1～20:2～15:1～10的混合溶液；在一些更为典型的实施方案中，所述流动相A为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为950～1000:5～10:1～5的混合溶液；流动相B为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为1～20:2～15:1～10的混合溶液；在一些最为典型的实施方案中，所述流动相A为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990：7：3的混合溶液；流动相B为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液。

在一些实施方案中，所述流动相A和流动相B按照下表进行梯度洗脱。

在一些实施方案中，所述流动相的流速为0.5～2.0ml/min；在一些典型的实施方案中，所述流动相的流速为0.8～1.2ml/min；在一些更为典型的实施方案中，所述流动相的流速为1.0ml/min。

在一些实施方案中，所述反相色谱柱采用非极性固定相作为填料；在一些典型的实施方案中，所述反相色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填料，且其规格为250mm×4.6mm，5μm；在一些更为典型的实施方案中，所述反相色谱柱为Waters XBridge C18，其规格为150mm×4.6mm，3.5μm。

在一些实施方案中，所述分析方法在高效液相色谱仪上进行，采用二极管阵列检测器、紫外检测器、示差折光检测器或蒸发光散射检测器；在一些典型的实施方案中，所述分析方法在高效液相色谱仪上进行，采用紫外吸收检测器；在一些更为典型的实施方案中，所述分析方法在高效液相色谱仪上进行，采用紫外吸收检测器，且其检测波长为260nm。