[发明专利]一种基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含：酶标板、辣椒碱标准品、酶标物、显色液、终止液、10×浓缩洗涤液、抗体工作液、样品稀释液和样品复溶液；

所述酶标板为已经用辣椒碱包被抗原制作好的酶标板，包被浓度为0.1µg/mL；

所述辣椒碱包被抗原制备过程为：

a、以香兰素胺盐酸盐作为半抗原，称取20mg于反应瓶中，加入 400μL DMF 溶解，称取11.4~11.6mg NHS 于反应瓶中，再加入 19.0~19.2 mg EDC盐酸盐，室温避光搅拌过夜；

b、取上清活泼酯液，分别逐滴滴加到224mg BSA 溶液中反应，反应缓冲液为 0.05mol/L pH 9.6 的碳酸盐缓冲液；反应在磁力搅拌下室内温度避光进行 4h，从加样结束开始计时；

c、将反应液置透析袋内，于 0.01M pH 7.4的PBS中4℃搅拌透析，每8h更换一次透析液，共更换4次，透析结束后，即得到辣椒素人工偶联抗原，即辣椒碱包被抗原；

所述抗体工作液为浓度0.6µg/mL的CGMCC No.14689的杂交瘤细胞株分泌所得抗体溶液。

2.根据权利要求1所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述辣椒碱标准品的浓度依次为0、 0.1ng/ mL、 0.25 ng/ mL、0.5 ng/ mL、1ng/ mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL；

所述酶标物为HRP标记的羊抗鼠IgG，工作浓度为0.1μg/mL；

所述显色液为显色液A液和显色液B液；

所述终止液为2mol/L硫酸溶液；

所述10×浓缩洗涤液具体为添加了质量浓度为0.05%Tween-20的0.02mol/L PBS缓冲液，其pH为7.4。

3.根据权利要求1所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述样品稀释液配方为：500mL浓度为96％以上的甲醇中加按质量浓度计1％乙腈、49％的浓度为97％以上的氯仿、0.025％ Tween-20。

4.根据权利要求1所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述样品复溶液配方为：950mL蒸馏水中加入按质量浓度计0.02％KCl、0.023％~0.024％KH₂PO₄、0.8％NaCl、0.362％~0.363％Na₂HPO₄、5％甲醇、0.025％Tween-20和0.02％PEG-20000。