[发明专利]用于指导瑞格列奈药物个体化用药相关基因检测的引物探针组合及试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种用于指导瑞格列奈药物个体化用药相关基因SNP的特异性引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括针对rs5219、rs290487、rs13266634基因SNP的特异性引物探针组合。本发明还公开了包含所述引物组合的试剂盒及其应用。本发明的有益效果在于：提供了一种快捷的用于指导瑞格列奈药物个体化用药相关基因SNP的分型试剂盒及应用，应用本发明获得的检测结果精确可靠，且成本较低，具有较好的实用性。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种用于指导瑞格列奈药物个体化用药相关基因检测的引物探针组合及试剂盒及应用。

背景技术

瑞格列奈为非磺酸脲类结构的胰岛素分泌促进剂，是一种模拟生理性胰岛素分泌的新型降糖药，现广泛应用于临床。瑞格列奈通过影响胰岛β细胞功能而发挥降糖等作用，作用机制类似于磺脲类药物主要是与磺酰脲类受体结合，关闭胰岛β细胞膜上的ATP-钾通道，造成钙离子内流，细胞内钙离子浓度增加而刺激胰岛素的分泌。跟磺脲类降糖药物比较，瑞格列奈具有起效快、作用时间短等特点，主要用于控制餐后高血糖，又称餐时血糖调节剂。用药过量会导致低血糖、胃肠道反应(如腹胀、腹泻、恶心等)、皮肤反应、血液系统反应(溶血性贫血)等不良反应。

考虑到瑞格列奈主要是作用于胰岛β细胞，那么机体对瑞格列奈药物的反应存在较大的个体差异也可能由影响胰岛β细胞功能的基因多态性引起。而KCNJ11基因在胰腺高度表达，对胰岛素分泌具有重要的调节作用，其rs5219G/A突变可能通过影响KATP通道对ATP的敏感性，从而影响β细胞胰岛素分泌功能。TCF7L2基因作为另一个可影响β细胞功能的基因，通过参与构成Wnt信号通路在β细胞功能调节方面发挥着重要的直接的或间接的作用，其rs290487 C/T变异也可导致胰岛素分泌减少。SLC30A8基因rs13266634位点的C等位基因是T2DM的风险等位基因，SLC30A8基因是中国汉族T2DM患者的易感基因之一，该基因的多态性影响瑞格列奈的疗效，突变基因型携带者使用瑞格列奈的效果优于野生型携带者。

《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南(试行)》指出：对药物代谢酶和药物靶点基因进行检测，可指导患者选择合适的药物和给药剂量实现“个体化”用药，提高药物治疗的有效性和安全性。

目前市场上采用的基因多态性检测技术有PCR-RFLP，其主要原理是通过应用特异性限制性内切酶消化PCR扩增产物，并根据消化位点是否消失来判断其变异存在与否，但该方法操作复杂，样本量多时易造成PCR产物的交叉污染且容易出现酶切不充分或酶切过度而出现假阴性或假阳性结果，可靠性低。多重PCR方法尽管特异性有所提高，但是这种方法的原理仍然是基于普通PCR的原理，引物特异性以及低保真Taq酶等这些因素均可造成对结果的影响。DNA测序法虽然是目前进行基因诊断的金标准，但步骤繁琐，过程复杂，试剂价格昂贵，容易出现样本间的交叉污染而导致测序失败；另外测序仪的装备也超出了一般临床检验实验室的承受范围。高分辨率熔解曲线法是一种快速，简便，经济，实用的分型方法，但基因分型依赖于仪器温度控制的精密性，假阳性高。Taqman探针的方法采用特异性的荧光标记的探针，特异性强，灵敏度高且操作方便，快速。

发明内容

为了解决传统临床经验医疗方式诊断及瑞格列奈药物用药时易出现临床用药不良反应且没有合适的试剂盒产品的技术问题，本发明是采用Taqman探针与荧光定量PCR技术相结合的检测试剂盒，适用于临床推广和产业化。

本发明的目的之一在于提供一种用于指导瑞格列奈药物个体化用药相关基因SNP的引物探针组合。

本发明的目的之二在于提供包含所述相关基因SNP的引物探针组合的试剂盒

本发明的目的之三在于所述试剂盒的应用。

为实现本发明的目的之一，所采用的技术方案是：