[发明专利]生丝微菌LXL-PQ-409及其应用

说明书

生丝微菌LXL‑PQ‑409及其应用，属于生物工程技术领域。本发明一方面提供了一种新的生丝微菌LXL‑PQ‑409，保藏号为：CCTCC NO：M 2019284；另一方面提供了该生丝微菌LXL‑PQ‑409在发酵生产吡咯喹啉醌中的应用。本发明单位体积发酵液中得到的吡咯喹啉醌产率高，采用LC/MS进行定量分析，单位体积发酵液中吡咯喹啉醌产率达870 mg/L。采用葡聚糖凝胶柱层析和高速逆流色谱技术提炼，吡咯喹啉醌收率53%，纯度为93.7%。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具有涉及生丝微菌LXL-PQ-409及其应用。

背景技术

吡咯喹啉醌的生理功能及应用领域阐述。吡咯喹啉醌（Pyrroloquinolinequinone，PQQ）是一种具有较高的可溶性，热稳定性，含有3个羧基基团的红褐色醌类化合物，见光易分解。PQQ为多种脱氢酶（如葡萄糖脱氢酶，乙醇脱氢酶，乙醛脱氢酶和甲醇脱氢酶等）的辅助因子。PQQ对鱼藤酮引起的线粒体氧化应激，线粒体功能障碍等起保护作用，可以减少年龄相关的氧化应激和高脂血症；此外，它还通过刺激线粒体生物合成和代谢来恢复健康的线粒体。PQQ可以消除人体的自由基，避免因自由基过多引发的各种胃肠疾病、心脑血管疾病、癌症、抗衰老等作用，具有很高的应用价值。因此，PQQ被认为是继核黄素和烟酰胺之后第三类氧化还原酶的辅酶，也被归类为B族维生素的新成员，是一种新型的健康营养因子，在医药、食品、化妆品等领域具有广泛价值。

吡咯喹啉醌现有的生产方式描述。目前吡咯喹啉醌主要有两种来源：一是化学合成法，二是微生物发酵。化学合成法异构体多而重复、收率低，并且所用试剂易氧化造成风险较大。目前微生物发酵主要是以甲基单胞菌属（Methylomonas），甲基杆菌属（Methylobacterium），甲基菌属（Methylobacillus）及生丝微菌属（Hyphomicrobium）菌种为主要产生者。李慧芝等采用常压室温等离子体对Methylomonas extorquens AM1进行诱变，得到正突变菌株，其吡咯喹啉醌产量为54.0 mg/L；杨诗颖筛选得到的Hyphomicrobiumdenitrificans FJNU-6 能够发酵产生吡咯喹啉醌，经过紫外诱变后其产量为326 mg/L，可见生丝微菌是吡咯喹啉醌高产的潜力菌株。

作为一种新型的维生素、食品和化妆品活性成分，吡咯喹啉醌既能满足人们对安全性的要求，又具有巨大的应用价值。但目前对于吡咯喹啉醌高密度发酵生产及葡聚糖凝胶、高速逆流色谱高效提炼未见报道。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种生丝微菌LXL-PQ-409及其应用的技术方案。

所述的一种生丝微菌LXL-PQ-409，保藏号为：CCTCC NO：M 2019284。

所述的生丝微菌LXL-PQ-409在发酵生产吡咯喹啉醌中的应用。

所述的利用生丝微菌LXL-PQ-409发酵生产吡咯喹啉醌的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将所述的生丝微菌LXL-PQ-409点种于固体培养基表面进行活化培养；

2）将固体培养得到的菌苔接种至液体培养基进行液体培养，得到摇瓶种子液，并可按1～5%（v/v）接种量进行扩大培养，得到种子液；

3）将种子液接种至发酵培养基中进行高密度发酵生产，并从生丝微菌LXL-PQ-409发酵液中提炼制得吡咯喹啉醌。