[发明专利]一种面膜中透明质酸含量的检测方法

说明书

本发明公开了一种面膜中透明质酸含量的检测方法，包括分别在透明质酸‑TRC和面膜样品中添加稀释剂溶解成对照溶液和试样溶液，其中稀释剂为20%的0.05mol/L甲酸胺水溶液与80%的甲醇混合的流动相，然后向HPLC仪分别注入15‑25μL的对照溶液和试样溶液，通过示差折光检测器检测，得到透明质酸的峰面积后计算试样溶液中透明质酸的含量，本发明通过设置最佳比例的流动相溶液，使用三氟乙酸调整流动相最佳pH为4.00，设置流动相最佳流速为1.0ml/min，使用普通示差折光检测器，使得本发明的透明质酸的保留时间缩短为10‑15min内，在对面膜中的透明质酸含量进行大批量检测时，可以缩短总的检测时长，减少流动相溶液的用量，提高检测效率，减少检测成本。

技术领域

本发明涉及透明质酸的检测领域，特别是一种面膜中透明质酸含量的检测方法。

背景技术

目前透明质酸常用的检测方法为HPLC法，其中流动相的选择通常为KCl-磷酸盐缓冲液，此种方法中透明质酸的保留时间通常为20min左右，若用于大批量的透明质酸检测时间消耗较长，同时因为检测时间变长而导致流动相溶液的用量将增加，检测成本也将增加；另外目前检测方法通常使用ELSD或CAD检测器，较为麻烦，导致检测成本提高。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种快速准确、检测成本低的面膜中透明质酸含量的检测方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种面膜中透明质酸含量的检测方法:

(1)对照溶液的制备：在透明质酸-TRC中添加稀释剂溶解成浓度为0.4-0.6mg/ml的对照溶液，所述稀释剂为流动相，所述流动相为20％的0.05mol/L甲酸胺水溶液与80％的甲醇的混合溶液；

(2)试样溶液的制备：在面膜样品中添加所述稀释剂溶解成浓度为450-550mg/ml的试样溶液；

(3)所述试样溶液中透明质酸的含量的测定：HPLC仪中设置有色谱柱与进样器，采用所述进样器向HPLC仪分别注入15-25μL的所述对照溶液和试样溶液，通过示差折光检测器检测，分别记录所述对照溶液和试样溶液中所述透明质酸的峰面积，按外标法以峰面积计算得到所述试样溶液中透明质酸的含量。

本发明设置的所述流动相比例为20％的0.05mol/L甲酸胺水溶液与80％的甲醇，与所述流动相的最佳pH值为4.00结合，使得透明质酸的保留时间控制在10-12min内，大大缩小了检测时间，减少了流动相的使用量，降低了使用成本。本发明使用所述示差折光检测器，更为简单，检测成本降低。

所述流动相通过三氟乙酸调节溶液pH为3.50-4.50。所述流动相中的三氟乙酸可改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题，所述三氟乙酸与透明质酸的正电荷及极性基团相结合以减少极性保留以及屏蔽所述透明质酸上残留的极性表面，而且由于所述三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于200nm，对所述透明质酸在低波长处的检测干扰小，另外，所述三氟乙酸易挥发，可方便地从样品中除去。

另外所述三氟乙酸具有强酸性，可用于调节所述流动相pH，本发明中，当所述流动相pH＝4.00时，透明质酸的稳定性最好。

所述流动相的流速为0.5-1.5ml/min，本发明的所述流动相的流速设置为1.0ml/min时，透明质酸的峰形良好，且保留时间短，进一步地减少了检测时间，提高了检测效率。

本发明的透明质酸的保留时间为10-16min，本发明缩短了原有的所述透明质酸的保留时间，在对面膜中的透明质酸含量进行大批量检测时，可以缩短总的检测时长，不仅提高了检测效率，而且大大降低了检测成本。

所述色谱柱为NH₂色谱柱，所述色谱柱的柱温为30-50℃。

所述试样溶液中透明质酸的含量不小于0.1％。