[发明专利]一种肠道微生物样本DNA的常温保存液

说明书

本发明属于生物样本保存领域，尤其涉及一种肠道微生物样本DNA的常温保存液，其中用无菌水溶解10‑50mM的乙二胺四乙酸二钠(EDTA‑2Na)、5‑25mM的三羟甲基氨基甲烷(Tris‑HCl)缓冲液、1‑10mM的三(2‑羧乙基)膦(TCEP)、140mM的氯化钠(NaCl)、质量分数为10‑20％的甘油、质量分数为1‑8％的二甲基亚砜(DMSO)和质量分数为0.1％‑0.5％的十二烷基硫酸钠(SDS)，调制PH至8.0。采用本发明技术方案的肠道微生物DNA保存液具有以下优点，可长期室温保存及运输，操作简便；只需将新鲜粪便样本浸入所述的保护液中即可达到稳定微生物的构成。

技术领域

本发明属于生物样本保存领域，尤其涉及一种肠道微生物样本DNA的常温保存液。

背景技术

肠道微生物，即依靠人体肠道生存的数量庞大的微生物。成人肠道内微生物的数量约1014个，基因数目高达330万，约为人体基因数目的100倍，质量约1.2kg，与人体肝脏的质量很接近。随着宏基因组学、宏转录组学等技术的发展，已证实肠道微生物是人体代谢反应的重要参与者，可帮助人体完成多种生理生化反应。例如：这些微生物可提供人体代谢过程中所需的底物、能量和酶；还可利用代谢过程中产生的脂肪酸等促进人体上皮细胞的生长与分化；此外，这些微生物还能够合成人体生长发育所需的必要维生素和氨基酸以及促进各种离子的吸收。近年来，随着第二代测序技术的发展和生物信息学分析方法的日益完善，为研究肠道微生物与人体健康疾病之间的关系提供了有力的检测分析手段。人们已经认识到肠道微生物的失调与多种疾病的发生发展密切相关，例如：肠道疾病、肥胖、糖尿病等。

人体排出的粪便可以反应人体肠道内微生物的共生状态。当粪便从人体排出时，微生物的生存环境就发生了很大的改变，包括从肠道获取营养物质的来源的丧失和无氧环境转至有氧环境的改变。不同微生物应对环境改变的能力不同，造成微生物的种类和共生关系不同于排便前，不能很好的反应体内的真实状态。若能将刚离体的粪便样本保存在一种保护液中，即可固定微生物的总量、组成和相对丰度。这样可以保证样本的完整性，更好的反映人体肠道菌群的真实状况。

目前低温-20℃—-80℃保存粪便样本仍是较为常用的方法，此方法可降低菌群的代谢能力，一定时间内能够很好的保持菌群的固有状态。但此方法最大的局限性是适用性和灵活度较差，另外需要大型超低温仪器的支持。受检者一般采集样本后不能立即低温保存，微生物的总量、组成和相对丰度都有可能发生改变，不能准确的反应受检者肠道菌群的真实状况。

发明内容

为了克服上述方法的缺陷，本研究的目的是提供一种可常温保存，长期存放，常温运输且操作简便的肠道微生物样本DNA保存液。

为到达上述目的，本发明所采用的技术方案为：

一种肠道微生物样本DNA的常温保存液，其中用无菌水溶解10-50mM的乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)、5-25mM的三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCl)缓冲液、1-10mM的三(2-羧乙基)膦(TCEP)、140mM的氯化钠(NaCl)、质量分数为10-20％的甘油、质量分数为1-8％的二甲基亚砜(DMSO)和质量分数为0.1％-0.5％的十二烷基硫酸钠(SDS)，调制PH至8.0。

优选地，本发明所述乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)的摩尔浓度为45mM。

优选地，本发明所述三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCl)缓冲液的摩尔浓度为15mM。

优选地，本发明所述三(2-羧乙基)膦(TCEP)的摩尔浓度为8mM。

优选地，本发明所述甘油的质量分数为17％。

优选地，本发明所述十二烷基硫酸钠(SDS)的质量分数为0.3％。

优选地，本发明所述二甲基亚砜(DMSO)的质量分数为7％。