[发明专利]一种唾液乳杆菌Y4及其应用

说明书

本发明提供了一种唾液乳杆菌Y4及其应用，所述唾液乳杆菌Y4保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.17459；其可应用于抑制病原菌，该病原菌包括大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、单增李斯特菌等；其还可应用于制备食品、饲料等。本发明唾液乳杆菌Y4耐酸耐胆盐能力强，体外培养繁殖快，可用于微生态制剂的开发，可有效抵抗各病原菌的感染，对动物体具有有效的保护作用。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种唾液乳杆菌Y4及其应用。

背景技术

菌株(Strain)又称品系，表示同种微生物不同来源的纯种培养，从自然界中分离得到的每一个微生物纯培养都可称一个菌株。如培养伤寒杆菌时可从血液中、骨髓中、粪便中、胆汁中进行分离培养，而以胆汁中者最为良好，称为标准株。益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体，已被广泛应用于预防和治疗多种疾病，并且它们的效力在某些临床情境中有有力的证据。例如，WO 2007/043933记载了将益生菌用于制造食品、饲料产品、膳食补充剂，以控制体重增加、预防肥胖、增加饱腹感、延长饱腹感、降低食物摄入量、降低脂肪沉积、改善能量代谢、增强胰岛素敏感性、治疗肥胖和治疗胰岛素抵抗。

唾液乳杆菌是乳杆菌属的重要成员之一，大多数为动物体表和内部黏膜表面的益生菌之一。存在于胃肠道黏膜、口腔呼吸道黏膜及生殖道表面的益生菌作为一种活的常驻菌对肠道黏膜及呼吸道黏膜具有双重的保护作用，一方面它可以在黏膜表面内附着定植，维护胃肠道及呼吸道黏膜微生物菌群平衡；另一方面益生菌可直接与宿主的免疫系统尤其是宿主的黏膜免疫系统发生相互作用诱发黏膜免疫；并能够刺激脾脏、胸腺及法氏囊等免疫中枢器官的发育，还可以促进巨噬细胞发挥佐剂作用；通过影响黏膜系统细胞因子等的合成和分泌，从而增强T、B细胞对抗原刺激的反应性能，有效增强特异性免疫作用；黏膜表面常驻益生菌可以活化黏膜内的相关淋巴组织，增强sIgA生物合成，提高消化道黏膜及呼吸道黏膜免疫功能，通过诱导淋巴细胞和巨噬细胞产生细胞因子，发挥免疫调节作用，从而增强机体免疫功能。

发明内容

本发明的目的是提供了一种唾液乳杆菌Y4及其应用，该唾液乳杆菌Y4耐酸耐胆盐能力强，体外培养繁殖快，可用于微生态制剂的开发，可有效抵抗各病原菌的感染，对动物体具有有效的保护作用。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

本发明菌株分离自健康儿童的粪便，经MRS培养基接种培养、分离纯化后获得一株唾液乳酸杆菌(菌株号为Y4)，其微生物保藏号为CGMCC NO.17459；保藏日期：2019年03月29日；其分类命名为：乳杆菌属唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salvarius)；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

本发明主要通过以下方法从来自于健康儿童的粪便样品中分离得到上述唾液乳杆菌菌株。

将采集的儿童粪便直接接种于MRS固体培养基上，挑选特征明显的菌落反复环线分离，直至分理处形态、大小一致的菌落，进行革兰氏染色，对菌体形态进行显微观察；反复接种纯化后，即得。

经法国梅里爱公司API鉴定系统进行菌株判定，在进行分子生物学鉴别，本发明所分离得到的唾液乳酸杆菌菌株Y4的分类地位属于：乳酸杆菌属唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salvarius)。

该菌株在MRS平板上的菌落为半球形，表面光滑湿润，呈乳白色，直径约为1-2mm，大小均一；革兰氏染色观察，该菌株为革兰氏阳性菌，菌体杆状，宽：0.5-0.6um，长：1.2-3.0um；在MRS液体培养基(pH 6.2)中生长良好，呈均匀浑浊生长，在37℃，120 rpm转速下，8小时达到对数生长末期。