[发明专利]一种基于适配体荧光传感的铜绿假单胞菌检测方法

权利要求书

1.一种基于适配体荧光传感的铜绿假单胞菌检测方法，其特征在于，通过将适配体与荧光信号策略相结合，将修饰有BHQ-2和cy5的特异性探针发卡结构DNA和单链DNA适配体混合杂交，在混合液加入菌体后，细菌会和单链DNA适配体特异性结合，将单链DNA和发卡结构DNA分开，发卡结构重新恢复，cy5的荧光再一次被淬灭；

所述特异性探针发卡结构DNA序列：

5’-cy5-CCCCCGTTGCAAACGAACAAAAGCGAAAGGAAAAGCGAAAGCAACGGGGG

-BHQ-2-TACGGA-3’；

所述单链DNA适配体序列：

5’-cy3-CCCCCGTTGCTTTCGCTTTTCCTTTCGCTTTTGTTCGTTTCGTCCCTGCTTCCTTTCTTG -3’ ；

包括以下步骤：

（1）细菌培养：将铜绿假单胞菌ATCC 27853冻干粉复苏，分别划线接种于Lb营养琼脂平板和Lb液体培养基中，Lb营养琼脂平板放置于20℃冰箱中培养，液体培养基放置于恒温培养箱，设置转速150r/min培养；收获培养物用于检测；得到的活细菌悬浮液可直接使用或在4℃下储存；

（2）利用涂布法计数铜绿假单胞菌菌落，计算用于检测的细菌浓度；

（3）将修饰有BHQ-2和cy5的特异性探针发卡结构DNA和铜绿假单胞菌适配体单链DNA混合杂交，未混合前由于BHQ-2的淬灭作用，cy5被淬灭；然后按1:1的摩尔比将单链和发卡结构DNA混合后，形成DNA杂交双链，cy5远离淬灭基团，cy5发荧光；

（4）将所得的双链DNA复合物与培养获得的菌体混合后，细菌会和单链DNA适配体特异性结合，将单链DNA和发卡结构DNA分开；

（5）利用荧光光谱仪对荧光的变化进行分析，获得荧光的变化。

2.根据权利要求1所述一种基于适配体荧光传感的铜绿假单胞菌检测方法，其特征在于，步骤（1）所述恒温培养箱的培养温度为38℃，培养时间为48小时。

3.根据权利要求1所述一种基于适配体荧光传感的铜绿假单胞菌检测方法，其特征在于，所述单链DNA为铜绿假单胞菌的适配体，特异性探针发卡DNA与其部分互补，可被单链DNA打开。