[发明专利]一种天然纳米囊泡及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种天然纳米囊泡及其制备方法和应用，本发明的一种天然纳米囊泡在制备调控细胞转移及TGF‑β信号通路抑制剂中的应用。本发明的一种天然纳米囊泡在制备各种急慢性肝病或急慢性肝病引起的肝脏损伤药物或抑制剂中的应用。本发明的一种天然纳米囊泡在制备HCC原发性肝癌的药物或抑制剂中的应用。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种天然纳米囊泡及其制备方法和应用。

背景技术

外泌体作为多种细胞(包括肿瘤细胞)释放的纳米级生物囊泡，内含多种活性细胞因子、蛋白和遗传物质(mRNA、DNA和miRNA)等。本研究中，我们检测了不同侵袭特性肝癌细胞株和正常肝脏细胞来源的外泌体在上皮表型肝细胞癌细胞EMT中的作用和分子机制，研究结果发现，HCC细胞来源的外泌体可以促进受体细胞迁移和侵袭，诱导受体细胞E-cadherin表达减少，Vimentin 表达增加和EMT，且高侵袭HCC细胞来源的外泌体效果强于低侵袭HCC细胞和正常肝脏细胞外泌体。此外，体内实验同样提示高侵袭HCC外泌体较低侵袭HCC外泌体和正常肝细胞外泌体促进裸鼠体内HCC肺转移。总之，我们结果提示HCC来源的外泌体可能通过自/旁分泌方式诱导受体细胞发生EMT，成为 HCC转移的激动剂。

HCC术后复发和转移是影响患者预后的主要原因。肿瘤转移作为一个多步的过程，上皮性肿瘤细胞获得间质改变，即细胞发生上皮间质转化(Epithelial mesenchymaltransition，EMT)是肿瘤转移过程的第一步。干扰肿瘤的EMT过程可能降低肿瘤转移、侵袭能力，对HCC患者的预后带来改善。越来越多的研究发现肿瘤细胞可分泌释放大量的细胞外囊泡(包括外泌体)，肿瘤来源的外泌体通过转运多种生物活性分子(细胞因子、蛋白、mRNA和miRNAs等)调控肿瘤微环境影响肿瘤的进展、转移以及药物抵抗等。

近年来，研究发现外泌体可作为肿瘤微环境调控者影响肿瘤细胞侵袭和 EMT等。外泌体内的蛋白可随肺癌细胞表型变化而发生改变，而应用TGF-β诱导后的细胞来源的外泌体与上皮表型细胞共培养，发现受体细胞形态和表型标志蛋白均发生了变化。高度恶性的肿瘤细胞可能转运外泌体至低迁移能力的肿瘤细胞，促进其细胞增殖和体外侵袭、转移等。Rahman及同事等发现，高转移倾向肺癌细胞以及晚期肺癌患者血清来源的外泌体可通过上调Vimentin表达，介导EMT过程诱导非肿瘤受体细胞迁移、侵袭和增值能力增强。

以上结果表明，外泌体由肿瘤细胞释放进入胞外微环境，可通过转运生物活性分子至邻近或远处的靶细胞，参与调控靶细胞的进展和转移等。然而，目前HCC细胞来源的外泌体在HCC体外和体内侵袭、转移中的角色尚不明确，本研究试图探讨此问题，并进一步探讨不同侵袭特性的HCC细胞来源的外泌体是否存在作用差异以及具体分子机制等。

目前，缺乏一种有效、高产以及作用明确的天然纳米囊泡及其制备方法和应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种常温状态下有效、高产的提取肝脏细胞分泌的天然纳米囊泡及其制备方法和应用。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：本发明的一种天然纳米囊泡在制备调控细胞转移及TGF-β信号通路抑制剂中的应用。

本发明的一种天然纳米囊泡在制备各种急慢性肝病或急慢性肝病引起的肝脏损伤药物或抑制剂中的应用。

本发明的一种天然纳米囊泡在制备HCC原发性肝癌的药物或抑制剂中的应用。

进一步地，所述的细胞为HCC原发性肝癌细胞来源的外泌体。

进一步地，所述的HCC原发性肝癌细胞来源的外泌体促进体内HCC侵袭、转移。

更进一步地，所述的HCC原发性肝癌细胞来源的外泌体体可通过转运成纤维细胞生长因子FGF、血管内皮生长因子VEGF和表皮生长因子EGF活化受体细胞，影响细胞生长、迁移。