[发明专利]糖尿病诊断、筛查与风险预测的方法、标志物与试剂盒

权利要求书

1.糖尿病诊断、筛查与风险预测的DNA甲基化标志物，其中，所述标志物是基因VDR中的如下第(1)至第(7)组所示的七个CpG位点发生甲基化：

(1)34(基于SEQ ID NO.1)；

(2)83:87(基于SEQ ID NO.1)；

(3)191:195(基于SEQ ID NO.1)；

(4)245(基于SEQ ID NO.1)；

(5)272(基于SEQ ID NO.1)；

(6)423(基于SEQ ID NO.1)；

(7)102(基于SEQ ID NO.2)；

其中，所述序列中碱基的编号是基于SEQ ID NO.1和基于SEQ ID NO.2中所示序列中的碱基的编号，其中，各序列中第1个碱基的位置记为1。

2.用于检测权利要求1所述的DNA甲基化标志物的引物对，其中，所述引物对扩增含有权利要求1所述的第(1)组至第(7)组的DNA甲基化标志物的序列。

3.根据权利要求2的引物对，其中，所述引物对用于扩增SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸区段。

4.根据权利要求2或3的引物对，其中，所述引物对为SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4，SEQID NO.5和SEQ ID NO.6。

5.检测权利要求1所述的DNA甲基化标志物的方法，其中，所述方法包括

1)提取DNA样品，

2)对所述DNA样品进行亚硫酸盐处理，

3)用权利要求2-4任一项所述的引物对扩增所述亚硫酸盐处理的样品，获得扩增产物，

4)对所述扩增产物进行消化(例如采用SAP酶)，

5)对所述消化后的扩增产物进行转录和酶切，

6)采用质谱方法对所述转录和酶切产物进行检测，获得样品序列中权利要求1所述的DNA甲基化标志物的甲基化情况。

6.一种DNA甲基化标志物检测试剂盒，其中，所述试剂盒包括权利要求2-4任一项所述的引物对；或者所述试剂盒包括涵盖权利要求1所述的甲基化位点的探针序列，其中本发明的CpG位点中的C保持不变或者被T替换。

7.一种利用权利要求1所述DNA甲基化位点的数据预测糖尿病发生风险的计算机模块，其中，所述计算机模块包括：DNA甲基化值情况接收模块、数据存储模块、用于预测糖尿病发生风险的处理器模块和用于输出结果的输出模块，其中，所述数据存储模块存储接收到的数据、权利要求1所述的CpG甲基化情况，所述用于预测糖尿病发生风险的处理模块将所接收的DNA甲基化情况与权利要求1所述的CpG甲基化情况进行比较。

8.权利要求1或2所述的DNA甲基化标志物或者权利要求2-4任一项所述的引物对在糖尿病诊断、筛查与风险预测中的应用。

9.一种采用基因芯片对基因组中序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的片段进行检测的方法。

10.根据权利要求9的方法，其中，所述检测包括对基因组中序列为SEQ ID NO.1和SEQID NO.2的片段进行CG位点甲基化程度的检测。