[发明专利]一种新型K血清型副溶血弧菌及其应用

说明书

本发明提供一种新型K血清型副溶血弧菌及其应用。通过与69种已知K血清进行凝集反应和全基因组测序方法，确定新型K血清型副溶血弧菌，保藏编号为CGMCC No.17249。本发明制备的新型K血清，特异性强，可方便快捷地用于检测一种全新的且近几年逐渐上升的新型K血清型副溶血弧菌，为感染性腹泻病原诊断、监测和防控提供重要的检测技术。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种新型K血清型副溶血弧菌及其应用。

背景技术

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus，VP)是食源性疾病的主要病原菌，人类主要通过海 水暴露，生食或半生食海产品而感染，通常引起急性胃肠炎，偶尔也会引起伤口感染和败血 症，严重者可导致死亡。在我国，食源性疾病暴发监测网数据显示，副溶血性弧菌引发的食 源性疾病已超过沙门菌和金黄色葡萄球菌，成为食源性疾病暴发中最重要的生物性致病因素。

血清学分型常用于细菌的溯源和遗传变异研究。副溶血弧菌可根据热稳定的菌体抗原(O) 和热不稳定的荚膜抗原(K)进行血清分型。目前，日本副溶血弧菌分型委员会已确认了11 种O和69种K血清型。1996年以前，副溶血弧菌感染并没有呈现明显的优势血清型。直 至1996年2月在印度加尔各答市引起群体暴发性食物中毒事件的新型O3:K6血清型菌株出现。此新发菌株随后迅速在全球多个沿海国家及地区的人群中发生了广泛的跨洲际传播， 并导致了多起大规模暴发事件，成为了副溶血弧菌致病的最主要亚种。然而，自2013年起， 一种与O4血清凝集但与现有69种K血清均不凝集(KUT)的副溶血弧菌明显增多，在短期内形成跨地区、跨人群感染的优势传播，极有可能成为一种重要的流行株。全基因组测序发现该新型菌株的K抗原决定簇与目前NCBI数据库中副溶血弧菌K抗原决定簇的序列均不同。由此认为，该副溶血弧菌是一种新型K血清型菌株，命名为O4:KUT-recAin。已于2019年2 月20日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为CGMCC)，保藏编号 为CGMCC No.17249。待相关文章发表后，提交材料至副溶血弧菌血清分型委员会(日本) 进行新血清型命名。本发明涉及一种新型K血清型副溶血弧菌及制备其特异性血清用于腹泻 相关病原体的检测。制备的血清能有效地诊断和监测该血清型副溶血弧菌的暴发，对感染性腹泻病原的防控有着重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型K血清型副溶血弧菌，该新型K血清型副溶血弧菌的保 藏编号为CGMCC No.17249，分类命名为副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus，保藏日期为2019 年2月20日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西 路1号院3号，中国科学院微生物研究所)。该副溶血弧菌株的K抗原决定簇的氨基酸序列 SEQ ID No:1所示。

本发明的另一个目的是提供上述副溶血弧菌在制备新型K血清中的应用。

本发明所述的新型K血清，是用上述所述的副溶血弧菌作为抗原，免疫动物制备的，并 经过吸附作用，得到的特异性免疫血清。

优选的，所述的抗原为灭活抗原。

优选的，所述的动物为新西兰大白兔。

优选的，所述的血清是通过与其他不同K血清型菌株的吸附作用，实现特异性。

本发明所述新型K血清的制备方法，通过以下步骤实现：

(1)抗原准备：将副溶血弧菌接种于3％NaCl的BHI培养基中，37℃过夜培养后，收集菌体，用生理盐水清洗2次后，用含0.5％甲醛的生理盐水溶液灭活菌体24h，之后将灭活的菌体溶于生理盐水中，作为抗原。

(2)收集免疫血清：