[发明专利]抗Mical2多克隆抗体及其制备方法有效
| 申请号： | 201910463149.6 | 申请日： | 2019-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN110331156B | 公开（公告）日： | 2021-10-12 |
| 发明（设计）人： | 李楠;杨玉洁 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C07K16/18 |
| 代理公司： | 深圳市恒申知识产权事务所(普通合伙) 44312 | 代理人： | 袁文英 |
| 地址： | 518060 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | mical2 克隆 抗体 及其 制备 方法 | ||
1.一种抗Mical2多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
构建含有Mical2基因的重组表达载体，所述Mical2基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述重组表达载体的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；
将所述重组表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞中诱导表达，获得Mical2蛋白抗原，所述Mical2蛋白抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；
将所述Mical2蛋白抗原免疫动物，获得抗血清，然后分离纯化获得抗Mical2多克隆抗体；
所述构建含有Mical2基因的重组表达载体包括：用NdeI内切酶和HindIII内切酶分别双酶切所述Mical2基因和载体pET30a，然后将酶切产物连接得到所述重组表达载体。
2.如权利要求1所述的抗Mical2多克隆抗体的制备方法，其特征在于，将所述重组表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞中诱导表达的步骤包括：将所述重组表达载体转化到BL21感受态细胞中，涂布到LB固体平板上培养，然后挑选单克隆菌落接种到LB液体培养基中培养，待培养至OD600为0.5-0.8，加入IPTG诱导表达。
3.如权利要求1所述的抗Mical2多克隆抗体的制备方法，其特征在于，将所述重组表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞中诱导表达，利用Ni-IDA树脂亲和层析纯化得到所述Mical2蛋白抗原。
4.如权利要求1所述的抗Mical2多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述Mical2蛋白抗原免疫的动物为新西兰白兔，免疫剂量为400 μg /次，免疫间隔周期为2-3周1次。
5.如权利要求4所述的抗Mical2多克隆抗体的制备方法，其特征在于，将所述Mical2蛋白抗原免疫新西兰白兔，当所述抗血清针对Mical2蛋白的效价大于1：50000，再分离纯化获得抗Mical2多克隆抗体。
6.如权利要求1所述的抗Mical2多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述分离纯化获得抗Mical2多克隆抗体的步骤包括：将Mical2蛋白抗原与琼脂糖介质偶联制备成抗原亲和纯化层析柱，然后将所得抗血清上样。
7.一种抗Mical2多克隆抗体，其特征在于，所述抗Mical2多克隆抗体由权利要求1-6任一项所述的抗Mical2多克隆抗体的制备方法制得。
8.如权利要求7所述的抗Mical2多克隆抗体，其特征在于，所述抗Mical2多克隆抗体的纯度大于85％；
所述抗Mical2多克隆抗体的效价在1：128000以上；
所述抗Mical2多克隆抗体用含20％甘油的PBS缓冲液储存。
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