[发明专利]一种重组间充质干细胞及其制备方法和用途

说明书

本发明公开了一种重组间充质干细胞及其制备方法和用途，所述重组间充质干细胞由趋化因子基因修饰间充质干细胞得到，其能够将无免疫源性的肿瘤转化为有免疫源性的肿瘤，同时能够与PD1抗体联用抑制实体肿瘤的增殖，显著增加瘤内浸润淋巴细胞的含量。本发明提供的重组间充质干细胞的制备方法，操作简单，条件易控，成本低廉，适合大规模应用。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种重组间充质干细胞及其制备方法和用途。

背景技术

免疫治疗已成为继靶向治疗后，肿瘤治疗领域的重要进展。特别是对于没有靶向驱动基因变异及治疗靶点的患者，免疫治疗的出现给他们带来了新的希望。同时，临床研究表明，肿瘤患者一旦响应免疫治疗，往往能带来长期的获益，甚至是疾病的完全缓解。

目前，已有多个PD-1/PD-L1抑制剂(如纳武利尤单抗和阿特珠单抗等)，共获批用于非小细胞肺癌、尿路上皮癌等12种实体瘤和所有微卫星高不稳定性(MSI-H)实体瘤的二/三线甚至一线治疗，但目前没有高效的单一针对PD-1/PD-L1抑制剂疗效预测的分子标志物。FDA批准用于指导免疫治疗患者筛查的生物标记物中，PD-L1表达阳性患者的免疫治疗有效率仍然很低。同时，虽然肿瘤突变负荷(TMB)是一种预测PD-1/PD-L1抑制剂治疗的重要标志物，但高TMB(TMB-H)患者的客观缓解率也仅有约30％。TMB联合PD-L1预测PD-1/PD-L1抑制剂效果也并不理想。

PD-L1蛋白表达反映的是肿瘤组织中潜在的PD-1/PD-L1药物作用靶点，而MSI-H和TMB-H一定程度上能反映患者肿瘤新抗原的数量。PD-L1表达阳性和TMB-H的患者响应PD-1/PD-L1抑制剂仍不理想的原因可能和肿瘤的免疫微环境有关，当中最重要的是肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的状态相关，只有在有浸润淋巴细胞存在的情况下，新抗原才能体现出免疫源性。

相关研究根据TILs的存在与否，将肿瘤分为所谓的“冷肿瘤”和“热肿瘤”，即，热肿瘤是有浸润淋巴细胞的肿瘤，而冷肿瘤则相反，“热”和“冷”反映的是肿瘤是否有免疫源性。冷肿瘤的PD-1/PD-L1抑制剂的有效率较低，而热肿瘤中PD-L1高表达的肿瘤则更有可能响应PD-1/PD-L1治疗，患者也可能有更多的肿瘤新抗原。

然而，在热肿瘤中PD-L1高表达的不同患者中，TILs的细胞类型和功能状态也不相同。同一患者不同时间TILs也并不是一成不变的，TILs的mRNA和蛋白表达会受疾病治疗等的影响，肿瘤免疫微环境的异质性影响了不同患者对免疫治疗的响应。例如：研究分析TILs不同类型细胞对免疫治疗的影响，CD3+和CD8+TILs与非小细胞肺癌、黑色素瘤等实体瘤更好的临床获益相关，然而只有CD8是一个独立的预后因素，而FOXP3+调节性T细胞等与免疫获益负相关；临床研究证实PD-L1表达阳性的TILs响应阿特珠单抗治疗。同时，TILs细胞类型、T细胞受体的克隆变化、肿瘤放化疗后的新抗原变化等都能反映免疫微环境动态变化的一部分，这些都能反映肿瘤对免疫治疗的响应。免疫微环境的变化，可能会使原本并不响应免疫治疗的患者，变为响应治疗。

但是，现有技术中无法高效改变免疫微环境，即无法高效实现“冷”“热”肿瘤的转化，使得PD1抗体在应用于实体瘤的治疗时存在应用限制，同时无法扩展免疫治疗应用范围及提高免疫治疗有效率。

因此，有必要提供一种重组间充质干细胞及其制备方法和应用，该重组间充质干细胞能够使肿瘤具有免疫源性，且能够对实体瘤实现有效治疗。

发明内容

为了克服上述问题，本发明人进行了锐意研究，利用具有趋化肿瘤杀伤细胞的趋化因子来修饰间充质干细胞，使得趋化因子在间充质干细胞中过表达，同时优化了制备过程中的病毒包装、转导等步骤，使得制备的重组间充质干细胞在肿瘤局部能够形成高浓度的趋化因子，实现无免疫源性的冷肿瘤能够转化为有免疫源性的热肿瘤，同时能够与PD1抗体联用抑制实体肿瘤的增殖，从而完成了本发明。

具体来说，本发明的目的在于提供以下方面：