[发明专利]一种基因多态性的检测方法

权利要求书

1.一种基因多态性的检测方法，其特征在于，包括：

预先合成CYP2D6基因的c.100C>T位点、c.1661G>C位点和c.4180G>C位点的特异性扩增引物和单碱基延伸引物，其中，所述C.100C>T位点的特异性扩增引物中的正向引物如SEQID NO.1所示，反向引物如SEQ ID NO.2所示；所述C.1661G>C位点的特异性扩增引物中的正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物如SEQ ID NO4所示；所述C.4180G>C位点的特异性扩增引物中的正向引物如SEQ ID NO.5所示，反向引物如SEQ ID NO.6所示；所述C.100C>T位点的单碱基延伸引物如SEQ ID NO.7所示，所述C.1661G>C位点的单碱基延伸引物如SEQ IDNO.8所示和所述C.4180G>C位点的单碱基延伸引物如SEQ ID NO.9所示；

从待测样本中提取出待测样本基因组DNA，并将所述待测样本基因组DNA作为DNA模板；

配置包含所述特异性扩增引物和所述DNA模板的聚合酶链式反应PCR扩增体系；

利用PCR仪对所述PCR扩增体系进行扩增反应，获得第一反应体系；

对所述第一反应体系进行消化处理，获得第二反应体系；

配置包含所述单碱基延伸引物的单碱基延伸反应体系；

向所述第二反应体系中加入所述单碱基延伸反应体系，并对加入所述单碱基延伸反应体系的所述第二反应体系进行延伸反应，获得第三反应体系；

对所述第三反应体系进行脱盐纯化处理，获得纯化产物；

利用包括有质谱仪的检测仪器检测所述纯化产物，确定所述待测样本的CYP2D6*10的基因多态性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述利用PCR仪对所述PCR扩增体系进行扩增反应，获得第一反应体系，包括：

利用PCR仪执行：

步骤A1：在90～98℃下，对所述PCR扩增体系预热0.5～10min；

步骤A2：在90～95℃下，对预热后的所述PCR扩增体系进行变性反应0.17～1min；

步骤A3：在50～60℃下，对变性反应后的所述PCR扩增体系进行退火反应0.17～1min；

步骤A4：在68～72℃下，对退火反应后的所述PCR扩增体系进行延伸反应0.5～10min；

步骤A5：将步骤A2、步骤A3和步骤A4循环25～45次，对延伸反应后的所述PCR扩增体系进行循环反应；

步骤A6：在68～72℃下，对循环反应后的所述PCR扩增体系进行终延伸反应0～10min，获得第一反应体系，并在2～8℃下，保存所述第一反应体系。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述对所述第一反应体系进行消化处理，获得第二反应体系，包括：

向所述第一反应体系中加入0.5～2U的碱性磷酸酶和对应的碱性磷酸酶缓冲液；

利用所述PCR仪，在30～40℃下，对加入所述碱性磷酸酶和所述碱性磷酸酶缓冲液的所述第一反应体系进行消化处理10～60min，并在70～85℃下，对消化处理后的所述第一反应体系进行加热变性处理5～30min，获得第二反应体系，最后在2～8℃下，保存所述第二反应体系。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，

所述碱性磷酸酶，包括：虾碱性磷酸酶、小牛肠碱性磷酸酶、大肠杆菌碱性磷酸酶和大鼠碱性磷酸酶中的任意一种。