[发明专利]锥虫核酸实时荧光PCR检测用引物及试剂盒

说明书

本发明属于生化与分子生物学检测技术领域，涉及一种锥虫核酸实时荧光PCR检测用引物及试剂盒，所述锥虫核酸实时荧光PCR检测用引物是非洲锥虫引物时，所述非洲锥虫引物包括：前引物：GCTAACAGAAGCACTTRGTGAAGTT，后引物：CCGACATGTTGGCTTCAAGA；所述锥虫核酸实时荧光PCR检测用引物是美洲锥虫引物时，所述美洲锥虫引物包括：前引物：AACACAACAACCACACAAAACTACAA，后引物：CCACGCCACTTTTTTTCTTTTTTA。本发明提供的引物特异性与灵敏度强，试剂盒检测速度更快、实验操作更简便、能广泛应用。

技术领域

本发明属于生化与分子生物学检测技术领域，涉及一种荧光PCR检测引物，尤其涉及一种锥虫核酸实时荧光PCR检测用引物及试剂盒。

背景技术

锥虫(Trypanosoma)是引起人类等脊椎动物锥虫病(trypanosomiasis)的病原，寄生于寄主血液和组织引起的疾病。人类锥虫病主要有非洲锥虫病和美洲锥虫病，非洲锥虫病(African trypanosomiasis)又称昏睡病，病原为布氏锥虫冈比亚亚种(Trypanosomabrucei gambiense)或布氏锥虫罗得西亚种(Trypanosoma brucei rhodesiense)，媒介为采采蝇(tsetse fly)；其中冈比亚锥虫病占昏睡病报告病例的98％以上，主要见于非洲西部和中部的国家，患者潜伏期较长，可感染数月甚至数年而无明显症状，发现时常常已到疾病晚期，中枢神经系统受累，预后不佳；美洲锥虫病(American trypanosomiasis)病原为克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)，媒介为锥蝽，主要发生于墨西哥以及中南美洲国家，主要临床症状为心脏病、巨食管症和巨结肠症。随着大规模的人口迁移,现已扩散至欧洲、加拿大、澳大利亚、日本以及一些非洲、中东、南亚国家等非流行区。随着国际交流的日益频繁，输入性锥虫病风险增加，需引起重视。

目前锥虫病原检测技术主要有血涂片吉姆萨或瑞氏染色镜检，分离培养，PCR检测等方法，但是存在检测时间较长，检测技术难以掌握，灵敏度相对较低等技术问题。其中，克氏锥虫急性期主要依赖于镜下查到锥虫，亦可行PCR检测；血培养、接种诊断法等虽可使用，但耗时较长，隐匿期和慢性期需依赖抗体检测，由于部分检测可能存在交叉反应，需两种免疫学方法检测均为阳性方可确诊，部分病例可行PCR以明确诊断。目前针对锥虫病原检测技术，Tomas Duffy等和Maria Piron建立了克氏锥虫的荧光定量PCR检测方法，Sven Beckera建立了布氏锥虫荧光定量PCR检测方法，但是都没有提出锥虫检测通用的荧光定量PCR检测方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的锥虫检测技术问题，本发明提供一种检测时间更快速、实验操作更简便、特异性与灵敏度强、能广泛应用的锥虫核酸实时荧光PCR检测用引物及试剂盒。

本发明采用的技术方案为：

所述锥虫核酸实时荧光PCR检测用引物是非洲锥虫引物和/或美洲锥虫引物；

所述锥虫核酸实时荧光PCR检测用引物是非洲锥虫引物时，所述非洲锥虫引物包括：

前引物：GCTAACAGAAGCACTTRGTGAAGTT；

后引物：CCGACATGTTGGCTTCAAGA；

所述非洲锥虫引物的扩增片段所采用的探针是AACAGGCATATGCTTCT；

所述锥虫核酸实时荧光PCR检测用引物是美洲锥虫引物时，所述美洲锥虫引物包括：

前引物：AACACAACAACCACACAAAACTACAA；

后引物：CCACGCCACTTTTTTTCTTTTTTA；

所述美洲锥虫引物的扩增片段所采用的探针是ACTCGCRAGAGATTAA。