[发明专利]猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟RT-PCR检测的引物及其联合检测方法

说明书

本发明提出了一种猪繁殖呼吸障碍综合征(PRRSV)和猪瘟(HCV)RT‑PCR检测的引物及其联合检测方法，包括猪繁殖呼吸障碍综合征检测引物对P1/P2和猪瘟病毒感染检测引物对H1/H2；猪繁殖呼吸障碍综合征检测引物对P1/P2包括引物P1和引物P2，猪瘟病毒感染检测引物对H1/H2包括引物H1和引物H2；通过一次试验可同时检测PRRSV和HCV两种疾病，一天内可完成检测，能够实现快速、特异地鉴别和诊断。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟RT-PCR检测的引物及其联合检测方法。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndromPRRS)，又称蓝耳病，由猪繁殖与呼吸综合病毒引起。该病最早于1987年发生在美国，随后在短短的几年内，迅速遍及全球各养猪业发达的国家和地区。1996年，我国首次在北京分离到PRRS 病毒，并证明是美洲株PRRSV感染所致。该病毒主要引起母猪的繁殖障碍与新生仔猪的呼吸道疾病，以免疫抑制和持续性感染，造成仔猪的高死亡率，给养猪业造成了巨大的经济损失。虽然目前有弱毒苗和灭活苗可用于PRRS的预防，但由于疫苗本身的缺陷和毒株在流行期间的不断变异，免疫预防效果不甚理想。该病是目前我国养猪业中造成经济损失最严重的疫病之一。2001年入夏前后，在我省和周边地区大面积爆发“猪高温综合征”以后，我省规模养猪场中 PRRS血清阳性率逐年升高，目前已高达80％以上。

猪瘟是较古老的疾病，至今已流行80多年。我国于1954年成功研制了猪瘟兔化弱毒疫苗(Hog Cholera Lapinised virus，HCLV)，随即在全国范围内推广应用，并于1956年提出了消灭猪瘟的规划。由于长期贯彻预防为主的指导思想，坚持广泛接种猪瘟兔化弱毒疫苗的综合性防治措施，本病在我国已经得到有效控制，大规模的爆发流行基本停止，但是猪瘟并未被扑灭，该病仍在全国范围内不间断地小规模地散发流行，仍是我国当前安全养猪的主要威胁。消灭猪瘟仍然还有很长的路要走。近年，由于猪繁殖呼吸障碍综合征、猪圆环病毒2型等免疫抑制性疫病的增加，猪瘟免疫失败亦时有发生。猪瘟发病数有所增加，并常与猪繁殖呼吸障碍综合征、猪圆环病毒2型合并发生。临床发病特征和病理剖检变化均呈不典型，难以作出准确诊断。

发明内容

本发明针对上述问题，从而提出了一种猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟RT-PCR检测的引物及其联合检测方法。

具体的技术方案如下：

猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟RT-PCR检测的引物，包括猪繁殖呼吸障碍综合征检测引物对P1/P2和猪瘟病毒感染检测引物对 H1/H2；猪繁殖呼吸障碍综合征检测引物对P1/P2包括引物P1和引物P2，猪瘟病毒感染检测引物对H1/H2包括引物H1和引物H2；

引物P1的序列为：5’-ATGCTTTCACGGAGTTCTTGG-3’；

引物P2的序列为：5’-AGGGTTGACACCTTATGG-3’；

引物H1的序列为：5’-ACCGACGGATAACAGAATAG-3’；

引物H2的序列为：5’-GGTAAGATTGTGAAGGGATA-3’。

猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟的RT-PCR联合检测方法，包括以下步骤：

1)、猪繁殖呼吸障碍综合征检测引物对P1/P2和猪瘟病毒感染检测引物对H1/H2；

2)、制备临床病料样品；

3)、病料样品的RT-PCR扩增并检测；

4)、鉴定RT-PCR检测方法的特异性。