[发明专利]一种快速检测野外黄河兰州鲇产卵场的方法在审
| 申请号： | 201910467717.X | 申请日： | 2019-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN110172518A | 公开（公告）日： | 2019-08-27 |
| 发明（设计）人： | 王俊;潘保柱;蒋小明;孙智薇 | 申请（专利权）人： | 西安理工大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 西安弘理专利事务所 61214 | 代理人： | 涂秀清 |
| 地址： | 710048 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 产卵场 黄河 快速检测 目的基因 检测对象 野外 抽滤 水样 荧光定量PCR 采样地点 人力物力 水样采集 提取DNA 传统的 滤膜 采集 繁殖 检测 分析 | ||
【权利要求书】：
1.一种快速检测野外黄河兰州鲇产卵场的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
步骤1：在黄河区域内寻找疑似产卵场的地点作为检测对象，并在鲇繁殖季节对检测对象所在地点进行水样采集；
步骤2：将采集的水样进行抽滤，对抽滤后的滤膜提取DNA；
步骤3：对提取的DNA进行荧光定量PCR反应，根据PCR反应结果分析比较各采样地点的目的基因的表达含量，目的基因表达含量高的即为黄河兰州鲇的产卵场的位置。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测野外黄河兰州鲇产卵场的方法，其特征在于，所述步骤3中荧光定量PCR反应所用的引物序列为：
F:AGGCCCAGACTCACTTCA
R:CCGTAACCGACCTAAACC。
3.根据权利要求1所述的一种快速检测野外黄河兰州鲇产卵场的方法，其特征在于，所述步骤3中荧光定量PCR反应的反应程序为：94℃预变性3分钟；94℃变性30秒，退火温度复性30秒，72℃延伸30秒，40个循环；72℃延伸5分钟；4℃保存，溶解曲线为以0.2℃的增幅从65℃递增到95℃。
4.根据权利要求1所述的一种快速检测野外黄河兰州鲇产卵场的方法，其特征在于，所述步骤3中荧光定量PCR反应的反应体系为：DNA为2μl、引物各1μl、超纯水为6μl、SYBR Taq为10μl。
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