[发明专利]一种分离测定LCZ696及其杂质的方法

权利要求书

1.一种分离测定LCZ696及其杂质的方法，其特征在于，具有以下步骤，

1)制备试样溶液

取LCZ696或含有LCZ696的制剂，加稀释剂溶解，得到浓度为0.1-10mg/ml的试样溶液，LCZ696或含有LCZ696的制剂中含有包括如下结构式的杂质(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)，

2)制备对照溶液

取步骤1)得到的试样溶液，加稀释剂稀释50-1000倍，得到对照溶液；

3)采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，设置流动相的流速为0.8-1.2ml/min，所述流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为浓度是0.0001-1.0mol/L的磷酸盐缓冲溶液，并加入三乙胺，100体积份的磷酸盐缓冲溶液中添加有0.0001-10体积份的三乙胺，流动相B为乙腈-甲醇混合液，乙腈、甲醇的体积比为55-45:45-55，流动相采用梯度洗脱方式进入色谱柱，0分钟，流动相A的体积百分数为60％，流动相B的体积百分数为40％；0分钟至20分钟，流动相A的体积百分数线性减少至40％，流动相B的体积百分数线性增加至60％；20分钟至50分钟，流动相A的体积百分数线性减少至20％，流动相B的体积百分数线性增加至80％；50分钟至55分钟，流动相A的体积百分数为20％，流动相B的体积百分数为80％；55分钟至55.1分钟，流动相A的体积百分数线性增加至60％，流动相B的体积百分数线性减少至40％；55.1分钟至60分钟，流动相A的体积百分数为60％，流动相B的体积百分数为40％；

4)分别向高效液相色谱仪进样等体积的步骤1)试样溶液、步骤2)对照溶液，进样量为5μl-100μl，利用200nm至280nm波长检测，记录色谱图，完成试样溶液中杂质的分离测定。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)、步骤2)所述稀释剂为甲醇和水的混合物，甲醇与水的体积比为65-95：35-5。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，甲醇与水的体积比为80：20。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中流动相A为浓度是0.001-0.01mol/L。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述磷酸盐缓冲溶液使用的磷酸盐为磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二胺或任意混合，磷酸盐缓冲溶液的pH值为2.0-3.5。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)进样时，进样量为10μl，利用255nm波长检测，色谱柱的柱温为20-40℃。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，色谱柱的柱温为30℃。