[发明专利]一种与甜瓜白粉病抗性相关的分子标记BanII-1及其应用有效
| 申请号： | 201910469553.4 | 申请日： | 2019-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN110055351B | 公开（公告）日： | 2022-04-22 |
| 发明（设计）人： | 高鹏;崔浩楠;栾非时;刘识;丁卓;王学征 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 田鸿儒 |
| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 甜瓜 白粉病 抗性 相关 分子 标记 banii 及其 应用 | ||
1.一种与甜瓜白粉病抗性相关的分子标记BanII-1的应用，其特征在于：包括以下步骤：
（1）提取待测甜瓜植株基因组；
（2）以步骤（1）所得基因组为模板，利用分子标记引物进行PCR扩增反应，获得PCR产物；所述分子标记引物，正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物核苷酸序列如SEQID NO.2所示；所述PCR产物大小为720bp，核苷酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示；
（3）使用BanII限制性内切酶对步骤（2）所得的PCR产物进行酶切，得酶切产物；
（4）利用琼脂糖凝胶电泳对步骤（3）所得的酶切产物进行鉴定，根据鉴定所得酶切产物片段大小判定待测甜瓜植株为甜瓜抗单囊壳白粉菌2F生理小种或甜瓜不抗单囊壳白粉菌2F生理小种，所述判定方法具体为：当酶切产物片段为一种片段，且大小为720bp时，判定待测植株为甜瓜抗单囊壳白粉菌2F生理小种；当酶切产物片段为两种以上片段，且大小包括307bp和413bp时，判定待测植株为甜瓜不抗单囊壳白粉菌2F生理小种。
2.根据权利要求1所述的与甜瓜白粉病抗性相关的分子标记BanII-1的应用，其特征在于：步骤（2）PCR扩增反应程序为：94℃预变性10min，94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环，72℃延伸10min，4℃保存。
3.根据权利要求1所述的与甜瓜白粉病抗性相关的分子标记BanII-1的应用，其特征在于：步骤（2）PCR反应体系包括：Taq酶、10×Buffer、正向引物、反向引物、DNA模板、去离子水。
4.根据权利要求1所述的与甜瓜白粉病抗性相关的分子标记BanII-1的应用，其特征在于：酶切体系包括：步骤（2）所得的PCR产物、BanII限制性内切酶、CutSmart Buffer、去离子水。
5.根据权利要求4所述的与甜瓜白粉病抗性相关的分子标记BanII-1的应用，其特征在于：酶切体系37℃水浴酶切过夜。
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