[发明专利]一种用于蚊虫的RNAi纳米颗粒和制备方法及用途

说明书

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种用于蚊虫的RNAi纳米颗粒和制备方法及其用途，所述的用于蚊虫的RNAi纳米颗粒，包括壳聚糖和dsRNA；所述壳聚糖具有40‑100kDa的分子量，去乙酰化程度为70‑78％；通过选择上述壳聚糖包裹dsRNA得到的RNAi纳米颗粒，稳定性高，可以有效的将dsRNA送入蚊虫体内，干扰效果优良，能满足对蚊虫体内特异基因进行功能研究的要求。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种用于蚊虫的RNAi纳米颗 粒和制备方法及用途。

背景技术

目前，蚊虫中常用的RNAi方法包括注射、浸泡以及饲喂等。注射法成 本高，死亡率较高，对操作技术要求较高，重复性差，而注射法一般在成 蚊中应用较多，且雄蚊腹部不具有张力不利于注射，因此，用注射法对蚊 虫进行干扰具有很大的局限性。直接采用dsRNA进行浸泡或饲喂干扰蚊虫 特异性基因，然而在浸泡或饲喂的过程中，dsRNA暴露于外界环境中， dsRNA不稳定，容易降解，影响干扰效果。

壳聚糖(chitosan，CS)又称脱乙酰甲壳素，是由广泛存在于自然界的 几丁质(chitin)经化学处理脱乙酰作用得到。由于壳聚糖属于天然高分子具 有良好的安全性、生物相容性和微生物降解性等优良性能，从而被广泛研 究和应用于植物保护、生物治疗、基因工程、食品和医药等领域。壳聚糖 分子中存在带正电荷葡糖胺基，可与负电荷的DNA、dsRNA等产生静电作 用，二者经混合凝聚成多聚复合物，使得DNA与CS结合形成结构较为致密的纳米级粒。目前，已经有研究，将CS与dsRNA进行结合获得的纳米 微粒可以稳定的和有效的送入人体内或植物体内，然而由于蚊虫体积小， 通过饲喂的方式，将包裹dsRNA纳米颗粒送入蚊虫体内，干扰效果较差， 不能满足对蚊虫体内特异基因进行功能研究的要求，因此，还没有人成功 的提供一种CS与dsRNA结合的纳米颗粒更为稳定且可以有效传送至蚊虫体内。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于提供一种用于蚊虫的RNAi纳米颗 粒和制备方法及其用途，所述RNAi纳米颗粒可以更为稳定且可以有效传送 至蚊虫体内，满足对蚊虫体内特异基因进行功能研究的要求。

为此，本发明提供了如下技术方案：

一种用于蚊虫的RNAi纳米颗粒，包括壳聚糖和dsRNA；所述壳聚糖 具有40-100kDa的分子量，去乙酰化程度为70-78％。

所述的用于蚊虫的RNAi纳米颗粒，所述壳聚糖具有60-80kDa的分子 量，去乙酰化程度为75％。

所述的用于蚊虫的RNAi纳米颗粒，所述dsRNA为针对蚊虫的特异基 因进行设计的。

所述的用于蚊虫的RNAi纳米颗粒，所述壳聚糖和dsRNA的质量比为 1:4-10；优选的，质量比为1:8。

本发明提供了一种制备所述的用于蚊虫的RNAi纳米颗粒的方法，包括 如下步骤：

S1、将选定的壳聚糖溶解在醋酸钠溶液中制备壳聚糖工作液；

S2、向吸取的dsRNA中加入硫酸钠溶液配制得到dsRNA悬浮液；

S3、将壳聚糖工作液和dsRNA悬浮液混合，水浴静置，然后振荡混匀。

所述的方法，在S1步骤中，所述聚糖工作液中的壳聚糖的浓度为 0.05-0.06w/v％。

所述的方法，所述水浴静置步骤中，水浴温度为50-60℃，静置时间为 0.5-2min；优选的，水浴温度为55℃，静置时间为1min。

本发明提供了一种用于蚊虫的RNAi组合物，包括所述的用于蚊虫的 RNAi纳米颗粒。

所述的用于蚊虫的RNAi组合物，还包括蚊虫饲料和介孔二氧化硅；