[发明专利]一种用于土霉素检测的适配体电化学传感器的制备方法

权利要求书

1.一种用于土霉素检测的适配体电化学传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）GCE的预处理：

用粒径为0.05 μm氧化铝粉末抛光，用超纯水冲洗抛光的玻碳电极3~5次，清洗后，通过循环伏安法在0.1 mol/L KCl和5 mmol/L [Fe(CN)₆]^3-/4-的混合溶液中测试电极的性能，扫描速度为100 mV/s，扫描范围为-0.2~0.6 V；如果循环伏安法中两个峰值之间的差值小于120 mV，则证明电极可以继续使用；

（2）4-CP/GCE的制备：将400 μL的0.1 mol/L NaNO₂溶液加入到20 mL含有2 mmol/L 4-氨基苯甲酸和0.5 mmol/L HCl的溶液中成为混合液；将混合液充分震荡并且放置在室温下反应约5分钟，生成4-CP溶液，然后吸取20 μL4-CP滴涂在GCE表面，将修饰电极放置于在真空干燥箱中干燥20 min，得到4-CP/GCE；

（3）act/4-CP/GCE的制备：取0.1 mol/L EDC和0.1 mol/L NHS的混合溶液20 μL，滴定在4-CP/GCE表面以活化电极表面，得到act/4-CP/GCE，反应60 min后，用超纯水冲洗电极表面2~3次；

（4）apt/act/4-CP/GCE的制备：将20 μL且2 μmol/L带氨基的土霉素适配体滴涂在电极表面，4℃下孵育12 h后，冲洗电极表面，然后滴加20 μL1 mol/L乙醇胺，1 h后用超纯水冲洗2~3次，滴定20 μL浓度是1% BSA，室温下放置1 h，用超纯水冲洗电极表面，得到apt/act/4-CP/GCE。

2.根据权利要求1所述一种用于土霉素检测的适配体电化学传感器的制备方法，其特征在于适配体电化学传感器包括工作电极、参比电极、对电极，其特征在于所述工作电极为apt/act/4-CP/GCE，参比电极为饱和甘汞电极，对电极为铂丝电极。

3.根据权利要求1所述一种用于土霉素检测的适配体电化学传感器的制备方法，其特征在于所述适配体共价结合修饰玻碳电极的制备方法是：先在GCE表面修饰4-CP，得到4-CP/GCE；然后取0.1 mol/L EDC和0.1 mol/L NHS的混合溶液20 μL，滴定在4-CP/GCE表面，反应60 min后，用超纯水冲洗电极表面2~3次，得到act/4-CP/GCE；将20 μL且2 μmol/L带氨基的土霉素适配体滴涂在电极表面，4℃下孵育12 h，冲洗电极表面，然后滴加20 μL1且mol/L乙醇胺，1 h后用超纯水冲洗2~3次，滴定20 μL浓度是1% BSA，室温下放置1 h，用超纯水冲洗电极表面，得到apt/act/4-CP/GCE。

4.根据权利要求3所述一种用于土霉素检测的适配体电化学传感器的制备方法，其特征在于4-CP/GCE的制备方法：400 μL的0.1 mol/L NaNO₂溶液加入到20 mL含有2 mmol/L4-氨基苯甲酸和0.5 mmol/L HCl的溶液中成为混合溶液；将混合溶液充分震荡并且放置在室温下反应约5分钟，生成4-CP溶液，然后吸取20 μL4-CP溶液滴涂在GCE表面，将修饰电极放置于在真空干燥箱中干燥20 min，得到4-CP/GCE。