[发明专利]一种无血清人用狂犬病疫苗的保护剂及其应用

说明书

本发明提供一种无血清人用狂犬病疫苗的保护剂及其应用，其中所述狂犬病毒是用无血清培养基生产，生产全过程不含小牛血清或胎牛血清，成分中不含有明胶、水解明胶、右旋糖苷和任何动物来源的外源物质，在保证疫苗稳定性的同时，降低疫苗过敏反应，降低成本，提高疫苗质量，且对无血清培养基生产的狂犬病疫苗纯化后原液或冻干剂型的稳定性，观察表明，本发明提供的保护剂对液体剂型和冻干剂型均可起到对抗原和疫苗效力的保护作用，这说明，含有缓冲液、麦芽糖、海藻糖、山梨醇、精氨酸、谷氨酸钠的保护剂配方，能使无血清狂犬病疫苗保持稳定。

技术领域

本发明涉及疫苗制造领域，具体涉及一种无血清人用狂犬病疫苗的制备方 法及其保护剂。

背景技术

无血清人用狂犬病疫苗，由于培养过程不添加任何动物血清，纯化过程也 不添加任何蛋白，纯化后的病毒液总蛋白浓度远低于用牛血清培养系统生产的 疫苗，因此，无血清人用狂犬病疫苗需要保护作用更强，保护剂效果更好的保 护剂保护剂配方。

对于含血清生产的人用疫苗，人血白蛋白、明胶和右旋糖苷是冻干常用保 护剂和保护剂。

人血白蛋白来源于人血浆，是一种经典、优良的稳定剂，尤其是在冻干制 品中，能够对蛋白质的活性起到很好的保护作用。但由于人血白蛋白在疾病治 疗中需求量大，价格居高不下，会提高疫苗成本。同时，人血来源极其复杂， 容易导致污染，如肝炎病毒，艾滋病毒等。

明胶曾广泛用于病毒性疫苗的稳定剂，由动物胶原水解得到，来源于牛、 猪等动物。日本2000年前各种病毒性疫苗中均使用牛源明胶，1993年开始陆 续出现全身性荨麻疹、血管性水肿、喉头水肿、喘鸣等各种过敏反应报告。另 外，来源于牛或猪的明胶具有携带动物源性病毒的潜在危险。病毒侵入可能引 起人的海绵体脑炎等异种病毒传染性疾病。

从2000年开始，国内外开始将右旋糖苷引入疫苗保护剂，用以替代明胶。 但近年来发现，右旋糖苷偶有过敏反应如荨麻疹、皮肤瘙痒、发热、恶心、呕 吐、喘息、关节痛、出血等，极个别的有血压下降、呼吸困难和胸闷，过敏性 休克罕见。

目前市售的人用冻干狂犬病疫苗中，一般均采用上述三种成分作为保护剂。 因此本领域急需开发一种不含以上三种物质的安全、稳定的疫苗配方。

发明内容

本发明要解决的问题是提供了一种适用于无血清培养基生产的安全、稳定 的人用狂犬病疫苗的保护剂，及应用此保护剂的疫苗。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种无血清人用狂犬病 疫苗保护剂，所述保护剂(以质量百分比计)包括：海藻糖0.5％-2％、蔗糖3-7％、 山梨醇0.45-0.75％、尿素0.42％-1.2％、谷氨酸钠0.05％-0.2％、精氨酸或精氨 酸盐0.03％-0.06％，其余为缓冲液。

进一步的，所述缓冲液为磷酸盐或tris缓冲液，所述缓冲液的浓度为 5-30mmol/L，pH为7.0-8.0。

进一步的，所述海藻糖质量与山梨醇质量的比例≥1：1，所述海藻糖质量 与蔗糖质量的比例≥1：6，所述海藻糖与山梨醇的总质量≤蔗糖质量。

无血清人用狂犬病疫苗保护剂制备疫苗的方法，包括如下步骤：

步骤一：首先复苏Vero细胞，然后将复苏后的Vero细胞置于T25瓶内， 3-5天长成致密单层后，用0.25％胰蛋白酶消化，反复吹吸分散细胞，然后将悬 液与无血清培养基以1：6混合分种至新的培养器皿，然后每个T25培养瓶补加 5ml生长液，以此反复传代扩增，直至400平米的反应器，所述反应器培养采 用溶氧60％，搅拌速度40rpm，温度为37℃的连续灌流方式，用狂犬病毒PM株 感染接种所述反应器内培养的Vero细胞，收获培养上清液，得到收获液A；

步骤二：用一次性过滤器对步骤一中得到的收获液A进行澄清过滤处理， 得到收获液B；